WB da Lisati di Zebrafish - Problemi con le bande

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Cate90
Nuovo Arrivato

Citt�: Padova

38 Messaggi

Inserito il - 23 giugno 2015 : 22:47:50

Ciao ragazzi, nel mio laboratorio stiamo avendo qualche problema con WB di lisati di Zebrafish.

I campioni da confrontare sono: 4 da cellule in coltura, 4 da Zebrafish wild type e 4 da Zebrafish mutanti.
Le proteine sono state estratte con RIPA pi� cocktail di inibitori di proteasi, quantificate con Bradford e caricate a 20ug su un gel 8% acrilammide.

PROBLEMA: quando facciamo il blot di tubulina o GAPDH per controllare le quantit� caricate, troviamo bande coerenti tra i campioni provenienti da lisati cellulari. Mentre vi � un'alta e inspiegabile variabilit� tra quelli estratti da Zebrafish

Avendo ripetuto il Bradford diverse volte e confermato le quantit� escludo errori nel saggio.

Ogni consiglio � ben accetto!!

Buonaserata :)

Just live, without too words and troubles.