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Arianna P
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 29 ottobre 2015 : 17:25:07
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 Scritto da MolecularLab Mobile
Ciao,
il mio problema e' relativo a p-src (cell signaling) che non riesco piu a vedere in campioni precedentemente positivi e nemmeno in campioni nuovi che dovrebbero essere positivi.
Guardando il ponceau il transfer sembra ok.
Uso reagenti biorad.
Blocking con milk5%pbstween 0.1%
e anticorpi in milk 5% pbstween 0.1%. Ho provato anche delle varianti: nuova provetta di anticorpo, blocking bsa, tbs (anche se il ph era 8.5 della 10x), anticorpi in bsa...e...
Avete qualche consiglio?
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2015 : 20:07:26
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Scritto da MolecularLab Mobile
Se vuoi vedere una phosphoproteina non è che il problema è negli inibitori delle fosfatasi che si sono degradati negli estratti? |
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Arianna P
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2015 : 22:14:27
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Scritto da MolecularLab Mobile
Riesco a vedere p-her2 e anche p-akt. phospho mapk esce anche se a volte il segnale e' debole.
Dimenticavo, di solito carico 20 ug. Il trasferimento lo faccio a 300mA per 80 min |
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p-src in WB
Didattica
