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Neurospora
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32 Messaggi

Inserito il - 28 giugno 2016 : 18:15:56

Ciao a tutti!!
mi sto occupo di SNPs e devo eseguire un'analisi di genotyping con la macchina lightcycler480. Vorrei utilizzare un'unica sonda marcata con fluoroforo e capace di legarsi sia alla sequenza mutata che a quella wt. SimpleProbe format, per intenderci:

https://lifescience.roche.com/webapp/wcs/stores/servlet/PrintView?langId=-1&storeId=14501&articleId=67005#SimpleProbe Probes

Nel progettare le sonde sto applicando i seguenti parametri:
-lunghezza della sonda compresa tra 23 e 30 bp;
-base target situata pi� o meno al centro della sonda;
-fluoresceina e quencer al 5' della sonda;
-nessuna sovrapposizione con i primers;
-Tm della sonda pi� elevata rispetto a quella dei primers di 5-10�C;

Sto ragionando bene? Qualcuno svolge analisi simili? Si accettano consigli

Grazieeee