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Città: Viareggio

37 Messaggi

Inserito il - 13 aprile 2007 : 16:55:30

ciao a tutti.
devo fare una relazione sul confronto tra l'attività di un enzima in soluzione e quella dello stesso enzima immobilizzato.
Mi sto ingarbugliando in su una questione sicuramente banale, ma che ora come ora mi sta dando qualche problema:

ho 10 microlitri di enzima
900 di tampone
100 di substrato

ho misurato la variazione di assorbanza al minuto e calcolato le moli di substrato prodotte per ogni minuto;
ora dovrei calcolare l'atività enzimatica e non riesco a capire in che modo influiscono i vari fattori.

ad esempio : l'enzima e' 10 microlitri su un tot di volume totale, in che modo devo tener conto della concentrazione dell'enzima quando calcolo l'attività?
anche il substrato ovviamente e' diluito, in che modo influisce la sua diluizione? (considerando che calcolo il numero di moli posso "ignorare" la concentrazione del substrato nel calcolo dell'attività?).

mi rendo conto che si tratta di domande abbastanza banali, ma le vacanze di pasqua devono avermi rimbecillito -.-

terreno85
Utente Junior

235 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2009 : 18:34:56

L'attività enzimatica la calcoli a concentrazione saturante di substrato , poichè sono in quella situazione sei in grado di stabilire per ogni variazione di prodotto una variazione di concentrazione enziamatica . La legge di M-M dice che a saturabilità l'ordine di reazione diventa 0 , cioè la quantità di prodotto che si forma è indipendente dalla concentrazione del substrato , solo in questo caso Vmax = conc. enzima . Il concetto è come hai misurato l'assorbanza ? Lo hai fatto utilizzando analoghi del substrato oppure hai unito la reazione a deidrogenasi ? ecc ecc . Nel pratica comune si utilizza unire la reazione a deidrogenasi poiche ti misuri attraverso spettrofotometro l'assorbanza a 340 nm . In secondo luogo hai fatto i bionchi ? Per calcolare l'attività enzimatica , cièe la quantità di enzima necessario per convertire una micromole di substrato in prodotto in 1 min :

U.E = (delta Abs x Volume )/ coeff. estinzione x tempo

Questo è quello che posso dirti in generale , se vuoi una risposta più precisa dovresti spiegarti un pò meglio . Cmq spero che ti sono stato di aiuto ciao ciao

Una teoria può esserre provata da un esperimento. Ma nessun percorso guida dall'esperimento alla nascita di una teoria