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Alexandran92
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 Inserito il - 04 settembre 2018 : 18:46:41
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Ciao a tutti :) sto studiando una articolo scientifico in cui si va a valutare la capacità della sequenza 5'UTR di mTOR di mediare la traduzione cap.indipendente.
Nello studio per verificare che entrambi i geni (FLuc e RLuc)sono espressi dallo stesso mRNA si è provato ad utilizzare gli small interfering RNA.
"To unequivocally prove that both FLuc and RLuc are expressed from the same mRNA, and that no abnormal mRNA species appear either due to a cryptic splicing event between a 5#8242;-splicing site located within or upstream of RLuc and the mTOR 5#8242;UTR, or by cryptic promoter activity of the sequence within the mTOR 5#8242;UTR, siRNA-mediated depletion of FLuc or RLuc was performed as previously suggested (Van Eden 2004; Jackson 2013). To this end, FLuc or RLuc siRNAs were cotransfected with pR_F, pR_HBB_F, or pR_mTOR_F plasmids (Fig. 3C) into HEK293T cells. In parallel, siRNAs targeting the mRNA of the green fluorescent protein (GFP) were used as a nonspecific control. The RLuc and FLuc levels were normalized to protein content. The analysis revealed that RLuc siRNAs decrease both RLuc and FLuc activities to background levels (Fig. 3D). Similarly, siRNA targeting the FLuc cistron resulted in residual values of both FLuc and RLuc in all the constructs (Fig. 3D). These data indicate that pR_mTOR_F plasmid only expresses one species of transcript, the proper full-length mRNA".
Quello che non mi è chiaro è il perchè l'RLuc siRNA va a ridurre sia l'attività di RLuc che di FLuc.
Spero che possiate aiutarmi a capire :)
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siRNA
Didattica
Inserito il - 04 maggio 2019 : 11:46:53
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