Il DNA nel Gel Agariosio non ben separato s/o risolto

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Iurisci
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2 Messaggi

Inserito il - 04 novembre 2024 : 17:15:08

Buon pomeriggio, sono insegnante tecnico-pratico in un istituto biotecnologia, sto usando un Kit di campioni già digeriti di DNA fagico con gli enzimi di restrizioni EcoR1 e HindIII ....
E' la terza volta che li carico e per tre volte vedo praticamente suna sola banda, oggi ho caricato un gel più lungo, 10cm*14cm, allo 0.8% in modo da separare meglio (corsa più lunga) ho modificato la tecnica di colorazione nel senso che ho usato il CyberGreen anzichè un colorante blu (tipo Blu di metilene); la situazione è migliorata, ma siamo lontani da risultati DECENTI.
Potrebbe essere che ho un pettine da 15 pozzetti e il volume che mi suggerisce nel Kit è troppo grande (35ul) per cui il DNA non "affonderà" mai in maniera decente in quanto si diluisce lungo tutta la profondità del pozzetto? mi aiutate? grazie mille PS: purtroppo non sono stato capace di inviare foto

Iurisci
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 04 novembre 2024 : 22:27:02

purtroppo non riesco a inviare foto mi da errore continuamente quando allego

Patrizio
Moderatore

Città: Barcellona

1913 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2024 : 09:49:25

Ciao, Iurisci.
Non so quanto sono grandi i frammenti di DNA pero' piu' sono corti e simili nella lunghezza piu' la concentrazione del gel aumenta per separarli.
Hai una lampada UV per visualizzare il DNA dopo aver fatto lo staining con CyberGreen? stai usando un corretto buffer per la corsa?
Il volume poco importa, ma appunto devi vedere quanto e' la concentrazione di risoluzione nelle condizioni che hai