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Iurisci
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 04 novembre 2024 : 17:15:08
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Buon pomeriggio, sono insegnante tecnico-pratico in un istituto biotecnologia, sto usando un Kit di campioni già digeriti di DNA fagico con gli enzimi di restrizioni EcoR1 e HindIII ....
E' la terza volta che li carico e per tre volte vedo praticamente suna sola banda, oggi ho caricato un gel più lungo, 10cm*14cm, allo 0.8% in modo da separare meglio (corsa più lunga) ho modificato la tecnica di colorazione nel senso che ho usato il CyberGreen anzichè un colorante blu (tipo Blu di metilene); la situazione è migliorata, ma siamo lontani da risultati DECENTI.
Potrebbe essere che ho un pettine da 15 pozzetti e il volume che mi suggerisce nel Kit è troppo grande (35ul) per cui il DNA non "affonderà" mai in maniera decente in quanto si diluisce lungo tutta la profondità del pozzetto? mi aiutate? grazie mille PS: purtroppo non sono stato capace di inviare foto
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Iurisci
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2024 : 22:27:02
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| purtroppo non riesco a inviare foto mi da errore continuamente quando allego |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2024 : 09:49:25
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Ciao, Iurisci.
Non so quanto sono grandi i frammenti di DNA pero' piu' sono corti e simili nella lunghezza piu' la concentrazione del gel aumenta per separarli.
Hai una lampada UV per visualizzare il DNA dopo aver fatto lo staining con CyberGreen? stai usando un corretto buffer per la corsa?
Il volume poco importa, ma appunto devi vedere quanto e' la concentrazione di risoluzione nelle condizioni che hai |
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Iurisci
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 07 novembre 2024 : 16:28:56
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| ciao Patrizio, la tua è l'unica spiegazione che mi sono fatto pure io...ma fatto 3 volte e con concentrazioni diverse...forse ho sbagliato il Buffer (domani controllo), è l'unica cosa che non ho controllato, sai, io odio i KIT, perchè ci sono sigle e codici, non i contenuti (barattoli)...dove tu sai cosa prendi...senti, ma come si mette una foto che non riesco? |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2024 : 17:54:23
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Citazione:
Messaggio inserito da Iurisci
ma come si mette una foto che non riesco?
Guarda, in tutta sincerità non me lo ricordo piu' ... ci entro in questo forum di tanto in tanto un po' per nostalgia 
se non sbaglio devi usare altri siti tipo questo
https://it.imgbb.com
e poi copiare ed incollare il link che ti viene fuori, non ricordo che tu la possa caricare direttamente qui.
Che buffer stai usando? al di la' della concentrazione, riesci a vedere una banda netta oppure c'e' un po' di smear?
se ti va condividi il nome del kit
cheers
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Il DNA nel Gel Agariosio non ben separato s/o risolto
Didattica
