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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 12:35:03
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Citazione: Messaggio inserito da zio
quello che non capisco è il perchè si parli ancora di schotc, beuta con parafilm bucato e di cappe chimiche "teoriche??" e scusami GFpina, ma le slide sono esplicite ma un pò datate Io il gel lo preparo sciogliendo l'agar nel microonde e nelle boccette da 200cc con il tappo a vite, svitandolo un poco durante il riscaldamento facendo attenzione che non fuoriescha durante l'ebollizione. Sovente ne preparo diverse boccette in modo da poterle poi riscioglierle quando mi servono. Il bromuro lo aggiungo non subito (lascio raffreddare per via dei vapori!) prima di versare il gel nel lettino con supporto della BIORAD che non prevede schotc, già in bolla e rigorosamente sotto cappa, lascio raffredare e e non lo uso subito, lo conservo in frigo con qualche ml di tampone sulla superfice.
zio hai perfettamante ragione, anch'io il gel in realtà non lo preparo come detto...ma non uso lo scotch, non metto subito l'etidio, ne praparo di più e lo risciolgo...proprio come te!
Però io stavo semplicemente rispondendo alle domande di carmilla983:
Citazione: Messaggio inserito da carmilla983
potreste fornirmi una spiegazione dettagliata di come si fa un gel di agarosio?
una curiosità, mi ricordo che si deve mettere lo scotch intorno alla vaschetta dv s mette il gel, perchè? e i pettinini quando s mettono, prima o dopo aver colato il gel?
Citazione: Messaggio inserito da zio
scusami GFpina, ma le slide sono esplicite ma un pò datate
lo so ma è quello che ho trovato in internet e mi sembrava che fossero abbastanza esplicative per una persona che praticamente non l'ha mai fatto! |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 14:59:05
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Citazione: i chimici nel mio lab dicono che l'etidio non e' volatile
è vero...l'etidio di bromuro non è volatile...nel nostro laboratorio ci siamo letti e riletti data sheets, schede di sicurezza e pure legislazione a proposito...al massimo di volatile c'è l'acqua in cui l'etidio viene sciolto...però abbiamo fatto la lotta (e qualche volta ancora la facciamo)perchè tutto ciò che viene a contatto con l'etidio abbia delle zone prestabilite...resta comunque unamolecola intercalante, da usare con i guanti e il camice ben chiuso...
Citazione: quello che non capisco è il perchè si parli ancora di schotc, beuta con parafilm bucato e di cappe chimiche "teoriche??"
beato te zio che hai l'apparato biorad che non vuole lo scotch...ma le cellette elettroforetiche per gel di agarosio sono quasi eterne (altro che i vetri maledetti di quelle per sds-page...sì lo so che esitono i gel precast ma non tutti possono comprarli) e quindi spesso ci si trova a lavorare con apparati "vecchi" di qualche anno che richiedono ancora lo scotch... |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così... -Jessica Rabbit- |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 15:02:11
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ma tornando alle cose serie...carmilla983 l'hai fatta quest'esercitazione??? Com'è andata? |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così... -Jessica Rabbit- |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 16:20:41
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ragazzi chiedo scusa se ho involontariamente toccato la suscettibilità di qualcuno,siete tutti cordialissimi, bravissimi e sempre pronti a dare ottimi consigli(specialmente tu Silvia). Comunque Chiara, ogni 25-30 anni il parco macchine bisgna pure cambiarlo, poi magari in futuro il famigerato bromuro non si userà più e non avremo il problema p.s. in effetti in alcuni lab non lo usano più da tempo, adesso non mi ricordo bene, ma so che usano un'altra sostanza che lo sostituisce egregiamente ma poi ci vuole un altro tipo di lampada... un saluto a tutti |
zio |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 17:28:18
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zio figurati...no problem... credo tu ti riferisca al sybr green...fatalità proprio ieri mi sono letta il datasheet del sybr perchè il mio titolare vorrebbe eliminare tutti i prodotti cancerogeni dal lab...se non ricordo male tra l'altro ha la stessa emissione dell'etidio sono che di colore verde...purtroppo anche se meno dell'etidio anche il sybr è un intercalante e quindi anch'esso cancerogeno... qualcuno ne ha parlato anche qui nel forum qualche tempo fa (non riesco a recuperare il topic) dicendo che però aveva qualche difficoltà ad eliminarne i residui...
Ah...zio...quanto mi piacerebbe cambiare qualche attrezzatura...lo scotch della celletta dell'agarosio è niente
Chica |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così... -Jessica Rabbit- |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2007 : 23:27:08
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chica, non mi riferivo al sybrgreen, quello quando lo uso per la realtime, ha lo stesso effetto del bromuro ma almeno lo manipoli solo al momento della mix. comunque appena riesco ad avere notizie di questo sostituto del bromuro velo faccio sapere, nel frattempo se qualcuno già lo conosce è pregato di farcelo sapere, grazie.FORZA NAPOLI |
zio |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 15:00:58
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Citazione: Messaggio inserito da zio
ragazzi chiedo scusa se ho involontariamente toccato la suscettibilità di qualcuno,siete tutti cordialissimi, bravissimi e sempre pronti a dare ottimi consigli(specialmente tu Silvia). ....
Non ti preoccupare zio, non hai affatto toccato la mia suscettibilità figurati!!! Ero solo più preoccupata di fare confusione della mente di carmilla che deve fare l'esame! Cumunque grazie per l'apprezzamento!
Citazione: Messaggio inserito da Biochica
qualcuno ne ha parlato anche qui nel forum qualche tempo fa (non riesco a recuperare il topic) dicendo che però aveva qualche difficoltà ad eliminarne i residui...
Forse ti riferisci a questo topic? http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=2238
A proposito anche senza cambiare celletta, io ho un... "coso" non so come chiamarlo... che ha una parete fissa e una mobile, metti dentro la celletta, sposti la parte mobile in nodo da chiudere la celletta e coli il gel, non c'è bisogno dello scotch, si adatta a tutte le vashette! Non so il costo, ma magari mi posso informare!
Ciao a tutti
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 16:31:01
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cara GFPina ^_^ il "coso" che hai tu sarà del tipo simile a quello che uso io e cioè: WIDE MINI SUB CELL GT 15X10 W GEL CASTER- cod. 1704469 euro 380 GT UVTP GEL TRAY, 15X10cm cod. 1704416 euro 106 il tutto della BIORAD. sono della giusta dimensione e credo che non abbiano neanche un costo esagerato con qualche altro accessorio non si arriva ai 500 euro circa.(chica, a confronto dei reagenti consumabili, non credo siano spese pazze!!) |
zio |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 17:30:07
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dipendesse da me......a quest'ora non ti dico cosa mi sarei comprata... |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così... -Jessica Rabbit- |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 19:03:00
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Hai ragione zio ho controllato sul catalogo BIORAD il mio è il GEL CASTER… comprato ai tempi… prima del mio arrivo in laboratorio, probabilmente assieme alla celletta e al resto, quello che indicavi tu: WIDE MINI SUB CELL GT 15X10 W GEL CASTER- cod. 1704469 euro 380 (che al momento è in offerta a 329)
però lo vendono anche da solo:
Gel Caster, full size cod. 170-4412 MODEL 96 GEL CASTER- cod. 170-4514 MODEL 192 GEL CASTER- cod. 170-4517 ma non so i prezzi (per saperli devo contatare il rappresentante)
Volevo dargli un nome italiano che facesse capire cos’è ma non mi è venuto in mente niente! Non volevo fare troppa pubblicità, comunque ho visto che lo vendono anche altre ditte e viene attorno ai 70-100 euro.
Dai Chica magari riesci a fartelo prendere, lo so che spesso è dura!!!
ma non stiamo andando un po' troppo off topic?
Comunque aspettp di avere notizie da carmilla983!!! |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 20:21:58
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forse, xò il problema strumentazione è molto rilevante (come si dice dalle mie parti: " e vote 'e fierr fann 'o mast" trad: a volte i ferri fanno il maestro! magari si può proporre un topic a parte. ps la pubblicità in questi casi è inevitabile e le cose buone meritano una buona al contrario quelle cattive! Ah... "coso" si capisce lo stesso |
zio |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 22:49:54
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Mah... non è sempre un problema di $$$.... qui usiamo lo scotch e non ci mancano certo i fondi. Solo che per qualche motivo a me incomprensibile al nostro tecnico piace usare lo scotch e quindi non compra gli affari da mettere ai lati (le PCR le fa lui, quindi contento lui....) |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 23:16:10
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ok da te è sicuramente così, xò ti garantisco che da noi le cose vanno per un altro verso, lo scotch è solo l'esempio banale di una realtà molto più seria. la questione fondi $$$ è inesistente in certi lab mentre in altri ti fanno storie anche se sprechi un puntale!!! ti dicono NON CI SONO SOLDI! poi, paradossalmente, si sprecano milioni per progetti inutili e sorpassati, si spendono milioni per emergenze fantasma (vedi BSE ed Influenza aviaria), si perdono fondi europei per mancanza di progettualità,siamo gestiti da una classe dirigenziale che gestisce la cosa pubblica come cosa propria o meglio come "cosa nostra", potrei andare avanti per molto e non credo sia il caso di sembrare più polemico di quel che sono cmq caro chick80, l'Italia è e resterà questa ancora per molto salvo un miracolo. |
zio |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 23:37:00
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Ci sono anche lab in cui non mancano i soldi, ma se sprechi un putale o una soluzione te lo fa pesare la lab mate
O ci sono prof disposti a spendere billioni su qualcosa senza pensarci su 2 secondi, e che poi fanno storie per qualche centinaia di euro.
PERCHE?
(scusate l'OT)
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2007 : 23:52:33
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Certo certo, hai ragione zio, lo so benissimo, perchè ho lavorato un anno e mezzo in un laboratorio italiano, dove dovevi fare richiesta anche per avere un pacco di guanti.... Dicevo solo che lo scotch non è poi un problema così grande :) |
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rubio
Nuovo Arrivato
Città: Roma
13 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 16:05:34
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Citazione: Messaggio inserito da zio
chica, non mi riferivo al sybrgreen, quello quando lo uso per la realtime, ha lo stesso effetto del bromuro ma almeno lo manipoli solo al momento della mix. comunque appena riesco ad avere notizie di questo sostituto del bromuro velo faccio sapere, nel frattempo se qualcuno già lo conosce è pregato di farcelo sapere, grazie.FORZA NAPOLI
Si chiama GEL RED, è della Biotium. Io ho richiesto un campione omaggio, per me funziona bene e si utilizza nello stesso modo dell' etidio! (ops...forse la marca non si poteva dire? perdonatemi sono nuova del forum!) |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 16:55:31
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Voi non avete visto nulla in fatto di sprechi rispetto a ciò che ha visto negli anni la sottoscritta : apparecchiature da 40 milioni di vecchie lire usati per una trentina di campioni eppoi lasciati a far polvere; kits scaduti, mai aperti e gettati nel cestino, plastiche comprate sbagliate, campioni analizzati dopo 15 anni dopo essere stati ripetutamente scongelati..... Vi assicuro che in tempo di vacche magre finalmente gli sprechi si sono ridotti all'osso.PER FORTUNA!
Ma tornando ai gel, noi abbiamo usato il Syber Safe, non ricordo bene, mi pare fosse dell'Invitrogen, ma devo dire che non dava gli stessi risultati dell'etidio, nel senso che era molto meno sensibile. Visto che noi facciamo il gel nella maniera tradizionale ( anche se da poco non usiamo più lo scotch), sotto cappa, in microonde, lo scaldiamo nella beuta e lo coliamo, vi chiedo se le boccette con tappo a vite di cui parlate sono le Falcon, e vanno in microonde? Le tenete in piedi mettendole in un beker? L'idea mi piace moltissimo,c'è una controindicazione a mettere prima l'etidio? Nel senso che potrei prepararmi già in queste provette delle aliquote di gel con dentro l'etidio che terrei in frigo e al momento del bisogno non farei altro che scioglierle nel microonde ( che è sotto cappa) e colarle (sempre sotto cappa). E' fattibile? Grazie |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 19:41:37
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Beh noto che ormai stiamo divagando... ma va bene, si scoprono sempre cose utili!
Citazione: Messaggio inserito da cin
Ma tornando ai gel, noi abbiamo usato il Syber Safe, non ricordo bene, mi pare fosse dell'Invitrogen, ma devo dire che non dava gli stessi risultati dell'etidio, nel senso che era molto meno sensibile.
Perchè il Syber Safe e il Syber Green hanno uno spettro di eccitazione e di emissione leggermente diversi dall'etidio, quindi con gli UV tradizionali si vede ma è meno sensibile, io ho un acquisitore di immagine e mi hanno detto che per il Syber Green dovrei usare un altro filtro per vederlo al meglio.
Citazione: Messaggio inserito da cin Visto che noi facciamo il gel nella maniera tradizionale ( anche se da poco non usiamo più lo scotch), sotto cappa, in microonde, lo scaldiamo nella beuta e lo coliamo, vi chiedo se le boccette con tappo a vite di cui parlate sono le Falcon, e vanno in microonde? Le tenete in piedi mettendole in un beker? L'idea mi piace moltissimo,c'è una controindicazione a mettere prima l'etidio? Nel senso che potrei prepararmi già in queste provette delle aliquote di gel con dentro l'etidio che terrei in frigo e al momento del bisogno non farei altro che scioglierle nel microonde ( che è sotto cappa) e colarle (sempre sotto cappa). E' fattibile? Grazie
Non so cosa intendesse zio, ma ci sono beute e bottiglie di vetro col tappo a vite, le falcon dovrebbero andare nel microonde... ma scaldandoci dentro in gel... non so se resistono. Magari puoi fare una prova... ti consiglio senza etidio però! Visto che il tuo microonde è sotto cappa non dovresti avere problemi a risciogliere il gel con l'etidio. Io ce l'ho fuori dalla cappa, quindi preparo una beuta con più gel, lo sciolgo e poi ne verso la quantità che mi serve per il mio gel in un bekerino e aggiungo l'etidio, il resto lo tengo e lo risciogo la volta seguente.
Tornando OT:
Citazione: Messaggio inserito da cin
Voi non avete visto nulla in fatto di sprechi rispetto a ciò che ha visto negli anni la sottoscritta : apparecchiature da 40 milioni di vecchie lire usati per una trentina di campioni eppoi lasciati a far polvere; kits scaduti, mai aperti e gettati nel cestino, plastiche comprate sbagliate, campioni analizzati dopo 15 anni dopo essere stati ripetutamente scongelati..... Vi assicuro che in tempo di vacche magre finalmente gli sprechi si sono ridotti all'osso.PER FORTUNA!
Li ho visti... e li vedo... soprattutto "lo vedo" tutt'ora... uno strumento acquistato tanto tempo fa (prima che arrivassi in laboratorio!) che nessuno è mai riuscito ad usare (e appena arrivava una persona nuova in laboratorio volevano farlo provare), probabilmente manca qualche pezzo, ma la ditta è fallita tempo fa e non si può riparare... ma siccome "all'epoca è costato tanto" non si può buttare... porta via un sacco di posto sul bancone che è quindi inaccessibile (anche se ce ne sarebbe bisogno)... ma non riusciamo ad eliminarlo!
Citazione: Messaggio inserito da valia
O ci sono prof disposti a spendere billioni su qualcosa senza pensarci su 2 secondi, e che poi fanno storie per qualche centinaia di euro.
PERCHE?
Conosco bene la situazione Valia... tutto il mondo è paese!!! |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 22:55:57
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x Cin :le bottiglie che uso sono le Pirex da 200cc con tappo a vite, quelle che si usano in autoclave con il tappo a vite blu, ma le fanno anche altre marche dell'est europa adesso non ricordo quali xò le trovi in qualunque catalogo di vetreria.Puoi preparartene una certa quantità e poi distribuirlo nelle bott. suddette. IO Uso quelle da 200cc xkè ce ne metto giusto 100cc di gel e le tengo pronte in frigo.Il bromuro lo aggiungo al momento prima di versarlo un'agitatina e lo colo nel lettino,il tutto sotto cappa chimica , tanto è un operazione di un secondo quindi togli il microonde da sotto cappa se ti da fastidio; quando lo sciogli e lo risciogli ricordati di svitare un po' il tappo.
x rubio: ma, questo GEL RED ti permette di leggere con gli UV ? .
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zio |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 22:57:23
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a proposito, come si inseriscono le citazioni? |
zio |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2007 : 23:41:49
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Il problema è che si comprano le cose perchè "può sempre essere utile"... senza effettivamente pensare se veramente sarà utile. Credo che parte di questo derivi dal fatto che esistono molti laboratori in cui si vuole fare "di tutto un po'" e alla fin della fiera si fanno male tante cose invece di farne una sola per bene (e quindi necessitando solo degli strumenti per quella certa cosa). Conosco svariati esempi di questo, non solo in Italia.
PS: zio, per le citazioni basta scrivere
[quote ]quello che vuoi citare[/quote] (senza spazio nelle parentesi...)
Oppure, se vuoi quotare tutto un messaggio schiacci il pulsantino in cima al messaggio stesso. |
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rubio
Nuovo Arrivato
Città: Roma
13 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2007 : 11:39:21
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Citazione:
x rubio: ma, questo GEL RED ti permette di leggere con gli UV ? .
ciao zio! si, si legge con gli UV! allego la scheda tecnica, così hai tutte le informazioni che servono!
Allegato: GelRed.pdf 203,24 KB |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2007 : 23:07:39
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grazie rubio
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zio |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2007 : 23:14:31
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Citazione: Il problema è che si comprano le cose perchè "può sempre essere utile"... senza effettivamente pensare se veramente sarà utile. Credo che parte di questo derivi dal fatto che esistono molti laboratori in cui si vuole fare "di tutto un po'" e alla fin della fiera si fanno male tante cose invece di farne una sola per bene (e quindi necessitando solo degli strumenti per quella certa cosa). Conosco svariati esempi di questo, non solo in Italia.
chick la penso esattamente come te,che peccato vedere aborti di acquisto per svariate migliaia di euro che non sarannno mai usati!!! xò laddove si fà soprattutto diagnosi sei costretto a fare tante cose e talvolta nuove, ma in quel caso le DEVI fare per forza BENE |
zio |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2007 : 23:37:42
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Beh, lo spero bene! :) Ovviamente non mi riferivo alle situazioni di diagnostica, lì sicuramente è diverso, ma tu ne sai sicuramente più di me a riguardo! |
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