| Autore |
Discussione |
|
|
Crick82
Utente Junior
139 Messaggi |
 Inserito il - 23 giugno 2007 : 11:10:30
|
Una domanda banale.
Dopo aver estratto l'RNA ed aaverlo quantizzato, procedete sempre alla corsa dei campioni su gel oppure procedete direttamente alla fase di trascrizione inversa?
|
|
|
|
|
Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 23 giugno 2007 : 15:38:52
|
| Sempre prima una corsa di verifica |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
 |
|
|
Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 25 giugno 2007 : 10:56:23
|
La quantificazione può darti un risultato non del tutto attendibile...magari l'RNA c'è ma è degradato!
Lo devi correre sempre e verificare le tre bande |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
|
|
|
Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 27 giugno 2007 : 19:54:56
|
E' buona norma correre sempre l'RNA estratto su gel d'agarosio: oltre a verificare che sia in buono stato (nn degradato) è possibile anche verificare la quantizzazione...
Ossia...fatta la quantizzazione caricherai il volume necessario a vedre una banda di una data intensità...se la banda che osservi dopo la corse è diversa da quella attesa, vuol dire che la quantizzazione nn è stata precisa.
Inoltre, la quantizzazione nn ti permette di distinguere DNA da RNA (entrambi hanno massimo di assorbimento a lung d'onda 260nm)...qndi potresti aver sovrastimato l'estratto, perchè parte di quello quantizzato è DNA e NN RNA!!! Dalla corsa elettroforetica saresti in grado di distinguere i 2 diversi acidi nucleici e quindi accorgertene!
Mi sembrano buone ragioni per fare un'analisi elettroforetica del campione:) per qsto io lo faccio sempre!
|
Ascoltami con gli occhi... |
|
|
|
LUCIA14976
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 27 giugno 2007 : 22:38:06
|
| se il campione di RNA estratto non viene corso in condizioni denaturanti (es. gel di formammide) l'indicazione che si ha (es. da una corsa su gel di agarosio) è decisamente approssimativa. Inoltre se il metodo di estrazione dell'RNA è standardizzato la degradazione non è mai un così grosso problema, almeno che non si lavori con trascritti presenti in bassissime concentrazioni. quello che veramente può fare la differenza tra diverse estrazioni di RNA è la concentrazione di impurità nel campione (sali e/o proteine)in quanto possono interferire con la reazione di retrotrascrizione. Le impurità possono però essere rilevate durante la quantificazione del campione con uno spettrofotometro (nanodrop o altro) |
|
|
|
cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 28 giugno 2007 : 12:16:59
|
Noi andiamo direttamente alla quantificazione e quindi all'RT se si tratta di cellule, se invece sono tessuti diamo prima un'occhiata alla qualità dell'RNA mediante corsa con il Bioanalyzer dell'Agilent.
Considera che il metodo sono anni che è standardizzato.
Per vedere le contaminazioni usiamo kit commerciali, ma solo se abbiamo avuto problemi con quei campioni. |
|
|
|
samanta
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
Città: Godiasco Loc. S.Terme
1 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2008 : 09:06:01
|
Volevo sapere per cortesia da chi utilizza il nanodrop per quantizzare gli acidi nucleici, se ha provato a quantizzare l' RNA e il corrispondente cDNA dopo RT e quali valori indicativi di concentrazione ha trovato. Grazie
|
|
|
| |
Discussione |
|
RNA
Didattica
