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caralinda79
Nuovo Arrivato
Città: firenze
21 Messaggi |
 Inserito il - 04 luglio 2007 : 15:17:17
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Salve a tutti! Vi sottopongo il seguente quesito: ho estratto il DNA da una gelatina con un kit apposito che prevede la digestione con proteinasi K, una endonucleasi che taglia in modo aspecifico. Dopo la purificazione la lettura allo spettrofotometro mi da una concentrazione del DNA di 30 ng/microL, ma il rapporto 260/280 è 0,7. La PCR non viene.
Potrebbe essere dovuto a un eccesso di proteine che interferiscono con la taq?
Che faccio?
Pensavo di purificare ulteriormente con le colonnine che si usano per purificare il DNA da PCR..
HELP!
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 01:20:54
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| Quel rapporto è assolutamente insufficiente,cerca di ottenere almeno un rapporto di 1,7.Meglio se arrivi a 2. |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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caralinda79
Nuovo Arrivato
Città: firenze
21 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 09:28:44
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Lo so che il rapporto ottimale è tra 1.8 e 2. Volevo sapere come faccio ad ottenerlo in questo caso specifico.  |
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Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato
Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania
97 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 10:10:38
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| Ciao Caralinda, per me dovresti usare le colonnine. In tutte le mie purificazioni anche se avevo concentrazioni inferiori a 10ng/ml le PCR venivano comunque. Quindi è probabilmente dovuto a quelle contaminazioni. Quelle che usavo io erano uno dei vari kit "NucleoSpin" della Macherey-Nagel. Io purificavo prodotti PCR o DNA da gel di agarosio. Dovresti controllare se va bene anche per il tuo materiale di partenza. Ciao Ciao, spero di esserti stato d'aiuto. |
-B.del C.- |
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caralinda79
Nuovo Arrivato
Città: firenze
21 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 10:24:30
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eh già, a me vengono pcr meravigliose anche con 1 ng di dna in 30 microlitri di reazione..
ora provo!
grazie |
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spettrofotometro
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