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 Denaturazione proteine & precipitazione DNA
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vivisax79
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: Napoli


4 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2007 : 15:20:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vivisax79 Invia a vivisax79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!
volevo sapere dove posso trovare delle informazioni più dettagliate circa le funzioni di detrminate sostanze utilizzate comunemente in laboratorio.
Per esempio:la guanidina isotiocianato perchè viene utilizzata nell'estrazione di Rna?quali caratteristiche chimiche ne fanno un buon inattivatore delle Rnasi?
oppure, il fenolo come fa a denaturare le proteine?
o ancora:perchè l'etanolo serve a far precipitare il dna??
spero che qualcuno mi possa aiutare a trovare un afonte per soddisfare la mia curiosità
grazie 1000
viviana

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2007 : 21:58:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La guanidina isotiocianato denatura le proteine. La sua azione non è selettiva per le RNAsi, ma probabilmente è abbastanza potente nel denaturarle, quindi si usa al posto di altri composti.
Se guardi la struttura della guanidina isotiocianato vedrai che come il fenolo ha un anello aromatico.
La struttura di una proteina è determinata dalle forze in atto sui suoi vari gruppi. In generale c'è sempre una minima quantità di acqua che fa un po' da "collante" per tenere la proteina nella sua struttura corretta (es. tramite legami idrogeno).
Se metti una proteina in un ambiente non acquoso come il fenolo o l'isotiocianato, avrai una modifica di queste forze perchè andrai ad aggiungere interazioni aromatiche o di Van der Waals fra il fenolo e i gruppi aromatici e neutri della proteina.
Il meccanismo preciso di denaturazione credo cambi da proteina a proteina.

Infine, l'etanolo precipita il DNA perchè ha una costante dielettrica minore dell'acqua e quindi favorisce il complessamento del DNA carico - con gli ioni + (es. Na+, Mg++) presenti nella soluzione.
Vai quindi a formare dei sali del DNA che sono poco solubili e precipitano.

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vivisax79
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: Napoli


4 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2007 : 17:04:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vivisax79 Invia a vivisax79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie per la risposta solerte ed accurata!spero di poter ricambiare un giorno

viviana sasso
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