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valeriamassa
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
64 Messaggi |
 Inserito il - 23 luglio 2007 : 14:16:11
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Devo clonare il mio gene in un vettore virale: ho inserito negli oligo i siti di restrizione per due diversi enzimi, però un enzima crea estremità piatte e l'altro estremità coesive,qualcuno sa dirmi se avrò problemi al momento della ligazione??
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valeria |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2007 : 15:47:12
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Ciao,
la specificità aumenta con le estremità "stiky" di due enzimi che magari tagliano in modo diverso...
...comunque ci sono ligazioni più difficili di quella che hai scelto tu..
... il mio consiglio è quello di provare!
http://didattica.cribi.unipd.it/ingegenet/06Lucidi4x.pdf |
www.tlbspazio.it
Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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LUCIA14976
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2007 : 20:51:59
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non credo che darà particolari problemi basta digerire il vettore con gli stessi enzimi. i clonaggi blunt sono un po' più delicati e richiedono più tempo, quindi io per i tempi e per le modalità di ligasi considererei entrambi blunt, ciao |
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mikimix
Nuovo Arrivato
Prov.: Matera
Città: Marconia
17 Messaggi |
Inserito il - 10 agosto 2007 : 10:32:51
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Caio a mio parere anche se non ho una grande esperienza pratica è molto più facile che la ligazione avvenga con delle estremità protuting,magari scegli un altro enzima di restrizione,anche se in questo coso una delle due estremità dovrebbe legarsi facilmente riducendo i rischi di ricircolarizazione. |
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 10 agosto 2007 : 14:39:27
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| A livello teorico non dovresti aver problemi. Anch'io ti consiglio di provare. |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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là
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 11 agosto 2007 : 11:16:45
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ciao! penso che se digerisci il vettore e la parte del DNA da clonare con i medesimi enzimi non dovresti avere probleni con la ligazione. Se no usa altri enzimi che diano entrambi le stesse estremità.
Comunque ripeto non dovresti avere problemi in linea di massima. |
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Discussione |
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doppia digestione-blunt-cohesive ends
Didattica
