Citazione:

---

Messaggio inserito da imy85x

Allora,comincio nell'informarti che:
lo Splicing è dato da 2reazioni di transesterificazione successive che portano alla rimozione dell'introne e successiva unione dei 2 esoni.
le reazioni di transesterificazione sono mediate da un'enorme "macchina molecolare" detta SPLICEOSOMA!Tale spliceosoma è costituito da circa 150 proteine e 5 RNA(detti U1,U2,U4,U5,U6).i cinque RNA sono detti nel loro insieme piccoli RNA NUCLEARI(lunghi dai 100 ai 300 nucleotidi) e si complessano con diverse proteine formando le PICCOLE RIBONUCLEOPROTEINE(SnRNP) e tali complessi riconoscono le sequenze dell'introne che sono al 5'donatore di splicing,al 3'accettore di splicing e nel punto di ramificazione!
spero sia stata chiara!

---

Citazione:

---

Messaggio inserito da imy85x

allora:
1)l'approccio morfologico è l'osservazione al microscopio elettronico:
studiando il gene della (beta)globina al microscopio elettronico si è visto,per la prima volta,un introne.
-Gli scienziati presero il gene globinico e lo ibridarono,prima,con un pre-mRNA(colorato in blu) e ne scattarono fotografie al ME e poi lo ibridarono con un mRNA(maturo)scattando anke qui fotografie!
-nella prima ibridazione..dalle foto videro che un filamento di DNA(gene globinico)era spiazzato dal pre-mRNA in modo continuo.
-nella seconda,l'immagine di microscopia elettronica diede il cosiddetto R LOOP (ar loop),cioè si trovarono 2 filamenti singoli di DNA spiazzati e poi al centro c'era un pezzo di DNA a doppio filamento,questo spiega che l'RNA maturo,nella sua interazione col DNA, spiazza il singolo filamento che nel DNA è presente come ESONE ,ma al centro non lo spiazza perchè nell'RNA maturo non è presente l'INTRONE che sta in quel punto del DNA(che resta quindi a doppia elica).
Tale esperimento dà 2 osservazioni:
-Il trascritto primario(pre-mRNA) e quello maturo non sono identici.
-nella prima ibridazione,c'è esatta colinearità del gene con il pre-mRNA(isolato dal nucleo),mentre nella seconda ibridazione l'mRNA viene isolato dal citoplasma e qui non c'è esatta colinearità perchè l'mRNA ha perso una parte al centro,che prima possedeva!(si riferivano all'introne)

2)l'approccio biochimico fu fatto studiando il gene dell'OVALBUMINA e tale approccio dimostrò la presenza degli INTRONI nei geni!
-gli scienziati presero il cDNA dell'ovalbumina ,che avevano sequenziato,facendone così la mappa di restrizione.
Volevano andare a studiare il gene dell'ovalbumina digerendo il DNA,separando i frammenti,fare poi un Souther ed ibridare col cDNA marcato!Alla fine videro che il gene non era continuo,ma bensì era interrotto da frammenti(appunto gli INTRONI)


P.S: l'approccio biochimico non l'ho descritto in modo dettagliato...sarebbe troppo lungo...ma più o meno è riassunto ciò che hanno fatto!(naturalmente capiresti di più avendo le figure di ciò che ho descritto,ma non so come allegarle)

SPERO DI ESSERTI STATA UTILE!

---