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RNA world
Utente Junior

dna


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Inserito il - 11 dicembre 2007 : 00:04:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti...

sto leggendo un articolo su drosophila in cui mettono un gene reporter lacZ in un vettore con elemento P (piu il vettore helper con la trasposasi)... la mia domanda è se di solito con questa tecnica si va a rimpiazzare il gene wt o se semplicemente questo si integra nel genoma a caso.

grazie

valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi
Inserito il - 11 dicembre 2007 : 00:34:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si integra a caso! Le trasposasi non hanno nessuna specificita' o preferenza!
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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 11 dicembre 2007 : 16:33:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in questo caso allora nell'embrione di dorsophila verrà espresso anche il gene che normalmente è a valle del promotore, ma loro rilevano solo il prodotto di lacZ giusto?

cioè nel genoma ci sono il gene wt ed il suo promotore+ il gene lacZ + il promotore del gene wt?
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valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi
Inserito il - 11 dicembre 2007 : 23:05:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Bhe, bisognerebbe vedere in questo caso specifico come e' fatto il costrutto..
(il promotore di lacZ potrebbe essere modificato rispetto al promotore wt per esempio...) ma in linea generale si!
A meno che non vengano utilizzati embrioni knocked out per il tuo gene di interesse! In quel caso avresti solo una copia del promotore X (quella nel plasmide), e nessun prodotto genico!
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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 12 dicembre 2007 : 15:55:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
secondo me in questo caso l'embrione non è KO per il gene wt, nell'articolo non lo dice assolutemente, dice solo che ha inserito il gene LacZ attraverso un plasmidio che ha l'elemento P...

grazie!
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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 12 dicembre 2007 : 16:47:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
approfitto della tua presenza per chiederti un'ultima cosa.

alla luce di questa frase:
"the x-lacZ fusion genes were cloned into the pDM30 P-transformation vector and injected into rosy506 embrios along with plasmid helper"

come viene rilevato il cambiamento del fenotipo una volta che si è integrato il gene x? cioè rosy è il marcatore del fenotipo, ma non capisco come lo rilevo.

grazie
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valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi
Inserito il - 12 dicembre 2007 : 18:45:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
L'allele rosy 506 da' origine ad una forma tronca della proteina rosy (coinvolta nella pigmentazione dell'occhio), per cui gli embrioni 506 hanno occhi di un colore alterato (non so dirti che colore sia... Penso tendente al bianco).
http://flybase.org/reports/FBal0015008.html

Il plasmide pDM30 di sicuro porta il gene rosy wt, a valle del tuo costrutto x-LacZ. Gli individui in cui l'elemento P salta e si integra saranno riconoscibili perche avranno gli occhi con una colorazione normale.


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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 13 dicembre 2007 : 17:39:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille...

alla prossima, ciao!
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