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Autore Discussione  

valme83
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 18:50:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valme83 Invia a valme83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
qualcuno saprebbe indicarmi che tecnica potrei utilizzare per studiare i fattori di trascrizione che si legano ad un mio specifico promotore?
Fino ad ora conosco tecniche solamente per fare il contrario, e cioè cercare gli acidi nucleici che interagiscono con una data proteina...ma se invece io conosco solo la sequenza di DNA e voglio scoprire quali proteine ci si legano??
Grazie a tutti comunque!
Ciao ciao

Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 20:18:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quelle che mi vengono in mente così su due piedi sono Lucipherase Assay e il Dual Lucipherase Reporter Assay e l'EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)...

Edit: aggiungo anche l'Immunoprecipitazione...


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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6941 Messaggi
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 20:55:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non sono molto d'accordo con l'immunoprecipitazione... dovresti già sapere che proteina cerchi, e a quel punto potresti anche fare una ChIP. Con un EMSA puoi sempre andare ad esaminare la banda con altri metodi
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Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 21:11:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hai ragione Giuliano...Scusa ma ho avuto un attimo di sfarfallamento di cervello... :P


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MirrorHole
Nuovo Arrivato

Il Professore



14 Messaggi
Inserito il - 05 gennaio 2008 : 00:09:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di MirrorHole Invia a MirrorHole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Schuldiner86

Quelle che mi vengono in mente così su due piedi sono Lucipherase Assay e il Dual Lucipherase Reporter Assay e l'EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)...

Edit: aggiungo anche l'Immunoprecipitazione...


Ciao!
Scusa l'ignoranza! Potresti chiarire in che modo possono essere utili in questo caso Lucipherase Assay e Dual Lucipherase Reporter Assay?
Grazie in anticipo!
...accendere una candela è gettare un'ombra...
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Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi
Inserito il - 05 gennaio 2008 : 10:45:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Nel vettore per la Lucipherase puoi clonare il promotore che viene riconosciuto da un fdt...Se il signaling che parte attiva il fdt che tu supponi venga attivato, avrai la produzione di Lucipherase che potrai poi saggiare al luminometro...Con la Dual riesci ad avere una normalizzazione dei campioni tramite la presenza di un promotore di un gene house keeping e quindi riesci anche a quantificare quanto fdt è attivato e quanta trascrizione questo attiva...


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valme83
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 05 gennaio 2008 : 14:08:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valme83 Invia a valme83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sì schuldiner, ma comunque non riesco ad identificare che proteina ci si lega, no? posso solo vedere se viene trascritto...
mi hanno suggerito di provare una cromatografia per affinità immobilizzando il frammento di DNA da studiare, per recuperare poi a parte la frazione proteica che ci si lega...si potrà fare?
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