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Lisa.ody
Nuovo Arrivato



43 Messaggi
Inserito il - 18 gennaio 2008 : 14:45:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lisa.ody Invia a Lisa.ody un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sto studiando genetica per l'esame e ho dei concetti che mi sn poco chiari. se qualcuno di voi riesce a spiegarmeli in maniera semplice gliene sono grata.
i concetti sono:
analisi banche cromosomiche in lambda
il fattore 8 (situazione della presenza di un'isola CpG)
le famiglie multigeniche
i dupliconi

grazie mille
** un bacione Lisa

Lisa.ody
Nuovo Arrivato



43 Messaggi
Inserito il - 18 gennaio 2008 : 18:21:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lisa.ody Invia a Lisa.ody un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
spiego meglio quali sono i miei dubbi:
-per quanto riguarda il punto 1 non ho trovato una spiegazione chiara su libri o altro dell'analisi di banche genomiche in lambda. ho trovato solo uno schema in cui si partiva da placche di lisi su cui veniva appoggiata una membrana filtrante. dopo di che il filtro che ha DNA fagico adeso viene trattato per denaturare il dna , poi viene effettuata una ibridazione a cui segue una autoradiografia che permette la visualizzazione del clone fagico iniziale che contiene un determinato gene di interesse.
se ho ben capito dopo aver filtrato il Dna fagico sulla membrana dovrei denaturarlo ( e poi frammentarlo?) e poi dovrei fare una ibridazione utilizzando una sonda che contenga una sequenza che contenga il gene che voglio cercare. questa sonda si appaierà al frammento che contiene il gene di interesse e mi darà il segnale. è giusto?

-per quanto riguarda il gene del fattore 8 , io so che l'introne 22 del gene del fatt 8 contiene un'isola CpG a partire dalla quale vengono trascritti, in direzione opposta, due geni interni F8A e F8B. ma comefunziona precisamente?

-per quanto riguarda le famiglie multigeniche non mi interessa la definizione ma come si possono identificare mediante southern blot e mediante pcr.

mi sono accorta anche di non avere ben chiaro il southern genomico di un ibrido.
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ilarip
Utente Junior

haci

Prov.: Bologna
Città: Bologna


432 Messaggi
Inserito il - 18 gennaio 2008 : 18:53:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilarip  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di ilarip Invia a ilarip un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao lisa
allora io ti posso aiutare sulprimo punto quello delle librerie genomiche...
allora come hai già detto tu si parte dalle palcche di lisi costituita da tantissimi fagi tutti =fra di loro poi metto un filtro di nitrocellulosa (che sarebbe la tua membrana fltrante) poi si denatura tutto il dna poi si procede all'ibridizzazione con specifiche sonde per la sequenza di interesse e poi si effettua una autoradiografia che permette di visualizzare qual'è la piastra che contiene quel gene d'interesse.Se alla fine di tale processonn ottengo nessuna banda è perchè nn ho utilizzato abbastanza placche.
per essere sicuri che ci sia almeno un segnale devo determinare un certonumero di plache tramite una formula matematica:
n=Ln 1-p/Ln1-f
dove:
n=numero di placche da utilizzare
P=probabilità che il gene d'interesse sia nella libreria
F= frazione del genoma che sta nel ricombinante(nel nostro caso il fago lambda) tale valore viene così calcolato:
Pb inserto/Pb genoma intero
ciao spero di esserti stata d'aiuto

in bocca al lupo per l'esame
Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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Lisa.ody
Nuovo Arrivato



43 Messaggi
Inserito il - 19 gennaio 2008 : 11:55:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lisa.ody Invia a Lisa.ody un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille ilarip!
nessun altro può aiutarmi per quanto riguarda gli altri dubbi?
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