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pdm
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: palermo
3 Messaggi |
 Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:14:23
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Ho un problema , non riesco a clonare un frammento di 2500bp circa; potreste indicarmi un vettore dentro cui posso inserire tale frammento senza grandi difficoltà??Anche dei vettori di espressione :::grazie!!!!!!!!!!!!!!!!
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Piera Di Maggio |
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:24:27
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| pcDNA3 |
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pdm
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: palermo
3 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2008 : 11:40:02
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più che altro mi servirebbe un vettore di espressione dentro cui clonare il frammento di 2500bp circa in modo da mandarlo a sequenziare e farlo esprimere in cellule ospiti opportuni.
Grazie
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Piera Di Maggio |
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Archimedes
Nuovo Arrivato
Città: Boston, MA
20 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2008 : 12:00:29
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| pBR322 ? fino alle 6000 bp è anche abbastanza maneggevole... |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2008 : 14:32:11
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Citazione:
Messaggio inserito da Archimedes
pBR322 ? fino alle 6000 bp è anche abbastanza maneggevole...
meglio pcDNA3.1, pCEFL, oppure pBS con un promotore eucariotico e un poliA.
Se cerchi su internet ne trovi diversi commerciali e non
Se, invece, queste 2500bp derivano da una PCR potresti utilizzare il Topo cloning per clonarlo con alta efficienza.
il pBR322 è meglio usarlo in casi estremi poiché ha un'origine di replicazione debole e si amplifica con minore efficienza. Certo che può clonare "frammenti" fino a 23.000 basi, ma per un microframmento di 2500 i vettori classici sono più performanti.
x pdm: Fatti aiutare materialmente da un esperto in clonaggi, poiché anche piccoli errori che sembrano niente a chi inizia danno risultati completamente completamente diversi.
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clonaggio
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