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Autore

Discussione

pdm
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Citt�: palermo

3 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:14:23

Ho un problema , non riesco a clonare un frammento di 2500bp circa; potreste indicarmi un vettore dentro cui posso inserire tale frammento senza grandi difficolt�??Anche dei vettori di espressione :::grazie!!!!!!!!!!!!!!!!

Piera Di Maggio

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:24:27

pcDNA3

pdm
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Citt�: palermo

3 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 11:40:02

pi� che altro mi servirebbe un vettore di espressione dentro cui clonare il frammento di 2500bp circa in modo da mandarlo a sequenziare e farlo esprimere in cellule ospiti opportuni.
Grazie

Piera Di Maggio

Archimedes
Nuovo Arrivato

Citt�: Boston, MA

20 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 12:00:29

pBR322 ? fino alle 6000 bp � anche abbastanza maneggevole...

Neuroscience
Utente

659 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 14:32:11

Citazione:
Messaggio inserito da Archimedes

pBR322 ? fino alle 6000 bp � anche abbastanza maneggevole...

meglio pcDNA3.1, pCEFL, oppure pBS con un promotore eucariotico e un poliA.
Se cerchi su internet ne trovi diversi commerciali e non

Se, invece, queste 2500bp derivano da una PCR potresti utilizzare il Topo cloning per clonarlo con alta efficienza.

il pBR322 � meglio usarlo in casi estremi poich� ha un'origine di replicazione debole e si amplifica con minore efficienza. Certo che pu� clonare "frammenti" fino a 23.000 basi, ma per un microframmento di 2500 i vettori classici sono pi� performanti.

x pdm: Fatti aiutare materialmente da un esperto in clonaggi, poich� anche piccoli errori che sembrano niente a chi inizia danno risultati completamente completamente diversi.