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carlavanzato
Nuovo Arrivato

Citt�: caltanissetta

14 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2008 : 12:27:05

Qualcuno mi spiega l' assottigliamento delle bande e la relazione tra Cloro proteina SDS e glicinato?

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Prov.: Teramo
Citt�: teramo

100 Messaggi

Inserito il - 21 febbraio 2008 : 16:41:13

Al momento del caricamento del campione proteico tu hai la maggiorparte degli ioni dei 2 gels rappresentati da Cl- derivati dal Tris HCl mentre quelli del tampone saranno ioni glicinato. Questi che entrano nel gel a pH 6.8, sono molto vicini al loro pI ed hanno pochissima � mentre le proteine complessate all�SDS si interpongono tra le 2 specie ioniche:
� Cl- > � proteina---SDS > � Gly
Nel RG si avr� una situazione del tipo:
� Gly = � Cl- > � proteina---SDS
L�uguaglianza tra � Gly e � Cl- � garantita dal pH del RG.
Quando si applica la corrente gli ioni Cl- migreranno verso l�anodo (+) lasciandosi dietro un temporaneo spazio vuoto a bassa conduttivit� (inversamente proporzionale all�intensit� del campo e direttamente proporzionale alla concentrazione).
Le proteine senza altri elettroliti non riescono a migrare infatti vengono spinte successivamente dal fronte degli ioni Gly che prendono il posto degli ioni Cl-.
I grandi pori dello SG non ti attuano una separazione diversificata tra le proteine ma solo un impaccamento: esse migrano alla stessa velocit� degli ioni Gly. La maggiorparte delle proteine non assorbe la luce ed � necessario un metodo per rilevarle.
Per esempio il gel lo puoi incubare in una soluzione (stain solution) contenente il colorante Coomassie Blue Brilliant (CBB) che si lega ad AA basici, 50% di metanolo e 10% di acido acetico il quale avranno un ruolo solo funzionale quello cio� di fissare le proteine nel gel. Successivamente si dovr� decolorare con la destain solution senza cio� il colorante. ok??!!se vuoi ti invio la mia relazione sull'sds-page e wb....ciao

Davide*

carlavanzato
Nuovo Arrivato

Citt�: caltanissetta

14 Messaggi

Inserito il - 22 febbraio 2008 : 20:00:26

si grazie mi faresti un gran favore!!!troppo gentile!!!

alex782
Nuovo Arrivato

Citt�: San Francisco

5 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2008 : 01:00:06

Ciao Biotecnologo,
e' un problema se ti chiedo anch'io questa relazione su SDS-PAGE e wb?
Non ne so tanto di SDS-PAGE e relativo WB, e chi me le sta insegnando non parla ne' la mia lingua ne' l'inglese e quindi sto andando a intuito.
ho poi una domanda: dopo che ho fatto correre il gel, prima del wb vorrei verificare che le mie proteine abbiano corso, mi sembra d'aver capito che col colorante Coomassie Blue Brilliant si possa determinare cio'. e' corretto? e dopo la colorazione posso passare al wb senza che le proteine siano danneggiate?
grazie

Ale

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Prov.: Teramo
Citt�: teramo

100 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2008 : 14:55:54

ciao alex si...adesso ti spiego...la soluzione del cbb contiene metanolo e ac acetico che hanno la funzione di fissare le proteine sul gel ed impedire la loro perdita...con la destain solution cio� soluzione di decolorazione (solo con ac acetico e metanolo) non fai altro che diluire il colorante ed allontanarlo....
PS: per CARLAVANZATO e ALEX provveder� ad inserire la mia relazione sul qst sito...ciao ciao...

Davide*

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Prov.: Teramo
Citt�: teramo

100 Messaggi

Inserito il - 24 febbraio 2008 : 12:21:41

ecco la relazione di cui parlavo...

Allegato:

SDS-PAGE + WB.zip
370,56 KB

Davide*

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Prov.: Teramo
Citt�: teramo

100 Messaggi

Inserito il - 24 febbraio 2008 : 12:25:49

Allegato:

tesina WESTERN BLOTTING.doc
513,99 KB

Davide*

carlavanzato
Nuovo Arrivato

Citt�: caltanissetta

14 Messaggi

Inserito il - 24 febbraio 2008 : 15:08:34

Grazie 1000 biotecnologi, ma nn riesco ad aprire il file SDS PAGE

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Prov.: Teramo
Citt�: teramo

100 Messaggi

Inserito il - 24 febbraio 2008 : 16:48:10

il primo file � = al secondo...ho commesso un'errore...spero ti possa essere di aiuto

Davide*

carlavanzato
Nuovo Arrivato

Citt�: caltanissetta

14 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2008 : 22:35:36

ok allora L' ho salvato se sn uguali!!!utilissimo grazie 1000

biologonutrizionista
Nuovo Arrivato

25 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2008 : 18:29:24

very good!!

napster89
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 31 gennaio 2020 : 12:17:21

ma qualcuno mi pu� spiegare cosa si intende per conduttivit�?

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 02 febbraio 2020 : 12:10:15

https://it.wikipedia.org/wiki/Conduttivit%C3%A0_elettrica

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

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