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carlavanzato
Nuovo Arrivato
Città: caltanissetta
14 Messaggi |
 Inserito il - 10 febbraio 2008 : 12:27:05
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Qualcuno mi spiega l' assottigliamento delle bande e la relazione tra Cloro proteina SDS e glicinato?
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 21 febbraio 2008 : 16:41:13
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Al momento del caricamento del campione proteico tu hai la maggiorparte degli ioni dei 2 gels rappresentati da Cl- derivati dal Tris HCl mentre quelli del tampone saranno ioni glicinato. Questi che entrano nel gel a pH 6.8, sono molto vicini al loro pI ed hanno pochissima µ mentre le proteine complessate all’SDS si interpongono tra le 2 specie ioniche:
µ Cl- > µ proteina---SDS > µ Gly
Nel RG si avrà una situazione del tipo:
µ Gly = µ Cl- > µ proteina---SDS
L’uguaglianza tra µ Gly e µ Cl- è garantita dal pH del RG.
Quando si applica la corrente gli ioni Cl- migreranno verso l’anodo (+) lasciandosi dietro un temporaneo spazio vuoto a bassa conduttività (inversamente proporzionale all’intensità del campo e direttamente proporzionale alla concentrazione).
Le proteine senza altri elettroliti non riescono a migrare infatti vengono spinte successivamente dal fronte degli ioni Gly che prendono il posto degli ioni Cl-.
I grandi pori dello SG non ti attuano una separazione diversificata tra le proteine ma solo un impaccamento: esse migrano alla stessa velocità degli ioni Gly. La maggiorparte delle proteine non assorbe la luce ed è necessario un metodo per rilevarle.
Per esempio il gel lo puoi incubare in una soluzione (stain solution) contenente il colorante Coomassie Blue Brilliant (CBB) che si lega ad AA basici, 50% di metanolo e 10% di acido acetico il quale avranno un ruolo solo funzionale quello cioè di fissare le proteine nel gel. Successivamente si dovrà decolorare con la destain solution senza cioè il colorante. ok??!!se vuoi ti invio la mia relazione sull'sds-page e wb....ciao
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Davide* |
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carlavanzato
Nuovo Arrivato
Città: caltanissetta
14 Messaggi |
Inserito il - 22 febbraio 2008 : 20:00:26
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si grazie mi faresti un gran favore!!!troppo gentile!!! |
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alex782
Nuovo Arrivato
Città: San Francisco
5 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2008 : 01:00:06
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Ciao Biotecnologo,
e' un problema se ti chiedo anch'io questa relazione su SDS-PAGE e wb?
Non ne so tanto di SDS-PAGE e relativo WB, e chi me le sta insegnando non parla ne' la mia lingua ne' l'inglese e quindi sto andando a intuito.
ho poi una domanda: dopo che ho fatto correre il gel, prima del wb vorrei verificare che le mie proteine abbiano corso, mi sembra d'aver capito che col colorante Coomassie Blue Brilliant si possa determinare cio'. e' corretto? e dopo la colorazione posso passare al wb senza che le proteine siano danneggiate?
grazie |
Ale |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2008 : 14:55:54
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ciao alex si...adesso ti spiego...la soluzione del cbb contiene metanolo e ac acetico che hanno la funzione di fissare le proteine sul gel ed impedire la loro perdita...con la destain solution cioè soluzione di decolorazione (solo con ac acetico e metanolo) non fai altro che diluire il colorante ed allontanarlo....
PS: per CARLAVANZATO e ALEX provvederò ad inserire la mia relazione sul qst sito...ciao ciao... |
Davide* |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2008 : 12:21:41
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ecco la relazione di cui parlavo...
Allegato:  SDS-PAGE + WB.zip
370,56 KB |
Davide* |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
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carlavanzato
Nuovo Arrivato
Città: caltanissetta
14 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2008 : 15:08:34
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Grazie 1000 biotecnologi, ma nn riesco ad aprire il file SDS PAGE |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2008 : 16:48:10
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| il primo file è = al secondo...ho commesso un'errore...spero ti possa essere di aiuto |
Davide* |
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carlavanzato
Nuovo Arrivato
Città: caltanissetta
14 Messaggi |
Inserito il - 28 febbraio 2008 : 22:35:36
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ok allora L' ho salvato se sn uguali!!!utilissimo grazie 1000 |
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biologonutrizionista
Nuovo Arrivato
25 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2008 : 18:29:24
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| very good!! |
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napster89
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 31 gennaio 2020 : 12:17:21
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ma qualcuno mi può spiegare cosa si intende per conduttività?
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
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