microsatellite multiplex PCR [Richiesta spiegaz.]

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Autore

Discussione

sbezzo
Nuovo Arrivato

Prov.: Trento
Città: trento

3 Messaggi

Inserito il - 27 febbraio 2008 : 16:12:12

Chi mi puo spiegare come funziona la microsatellite multiplex PCR e i principi su cui si basa??!!?? Vi ringrazio molto......

hurricane86
Nuovo Arrivato

50 Messaggi

Inserito il - 27 febbraio 2008 : 17:18:10

se non ho capito male ti riferisci ad una tecnica utilizzata in genetica forense.(??)
la PCR multiplex è una PCR che contemporaneamente amplifica più loci utilizzando più primer contemporaneamente velocizzando di molto i tempi, il rischio che un primer si appai da una parte sbagliata sostanzialmente non c'è, dato che si appaiano per comlementarietà e viene utilizzata una condizione alta di stringenza.
i primer vengono presi complementari alle sequenze che stanno al di fuori del gene che vuoi amlificare. I loci iper variabili dei microstatelliti sono circondati da sequenze molto stabili. il principio della pcr stà nella replicazione (denaturo, appaio primers, polimerizzo su stampo..denaturo appaio....)e quindi nell'aumento del numero di copie del gene, in modo tale che questo possa essere visto tramite blotting.
i micro satelliti sono piccoli blocchi di sequenza altamente ripetuti ed in numero ipervariabile di volte, in genetica forense la usano per determinare i profili ed escudere o dare probabilità di identificazione dei sospattati nei crimini.

Think I'll lose my mind if I don't find something to pacify

....muore lentamente chi non esplora cio che non conosce....

valia
Moderatore

Prov.: UK

1001 Messaggi

Inserito il - 27 febbraio 2008 : 17:38:15

Citazione:
Messaggio inserito da hurricane86
...in modo tale che questo possa essere visto tramite blotting.

In realta' le diverse regioni amplificate vengono corse in un gel di agarosio o acrilammide e discriminate in base alla loro lunghezza (questo detto volgarmente, in realta' si usano tecniche automatizzate con elettroforesi capillare).

Guarda qui:
http:/www.molecularlab.it/interactive/tecniche/elettroforesi-simulazione.asp
http://www.molecularlab.it/interactive/tecniche/profiling.asp

Per la Multiplex puoi usare anche la funzione cerca del forum, se n'è gia' parlato:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=2439

sbezzo
Nuovo Arrivato

Prov.: Trento
Città: trento

3 Messaggi

Inserito il - 27 febbraio 2008 : 19:36:25

Molto gentili ed esaustivi!Ancora grazie....Se qualcuno riesce a darmi qualche altra dritta ugualmente interessante è ben accetta

!!!

Topogigio77
Nuovo Arrivato

Città: Milano

37 Messaggi

Inserito il - 14 marzo 2008 : 12:34:10

Sbezzo... quanto scritto sopra è corretto ma del tutto generico...a te per cosa potrebbe interessare quella applicazione?