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lalery
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 27 febbraio 2008 : 16:51:06
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Ciao a tutti,
abbiamo riscontrato dei problemi dopo il blocco dei siti aspecifici con BSA.
L'anticorpo utilizzato è un anti-fosfotirosina biotinilato a cui, successivamente, si lega anti-biotina coniugato con HRP che reagisce con la soluzione chemioluminescente. Beh, al termine dello sviluppo il background è spaventoso.
Ma la cosa più spaventosa è che ttengo le stesse bande e lo stesso background anche incubando solamente con un secondario anti-mouse...
Non so darmi una spiegazione plausibile, a meno di una BSA contaminata... 
AIUTOOOOOOOOOOO!
Grazie.
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2008 : 17:17:07
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puoi provare a bloccare in non fat dried milk al 5% in TBST 1X per 45' a 4°C.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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lalery
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2008 : 17:33:55
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Grazie, è proprio quello che sto facendo ora...
Speriamo in bene.
Ciao ciao |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2008 : 18:56:19
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comunque, sia che usi la BSA che il milk devi stare attenta ai lavaggi. fanne di più per eliminare bene tutto quello che non si lega.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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BSA nel Western Blot
Didattica
