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daniela82
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2008 : 17:54:01

ciao a tutti,
avrei bisogno di qualche aiutino in vista di un esame.
queste sono alcune domande di un esempio di compito che ho per prepararmi a cui non so rispondere con certezza:

1)volendo preparare una library di cDNA da una certa linea cellulare, con quale tipo di primers pu� essere effettuata la retrotrascrizione degli mRNA purificati dalle nostre cellule.?
a)esameri-ottameri a seguenza casuale(random)
b)oligo(dT)
c)oligo(dA)
d)con il complementare della sequenza ARS
(sono valide pi� risposte)

2)quale tecnica usereste per quantificare l'mRNA di una proteina, marcatore dei linfo T, in un tessuto umano?

3)vuoi purificare una proteina da usare come antigene e creare un anticorpo specifico. per facilitare la purificazione puoi usare un tag. Quale tag puoi usare? descrivi il sistema di purificazione pi� adatto.
lo so che non sono particolarmente difficile ma ho le idee molto confuse.
GRAZIE MILLE

marina1983
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2008 : 21:06:12

ciao,
per la domanda numero uno direi al 100% di usare gli oligo dT
per la domanda 2, la quantificazione dell'mRNA si fa con la real time PCR
per la domanda 3, si pu� usare il tag con HYS (istidina) piu un sito di taglio (per togliere il TAG quando non ti serve piu) e per purificare allora usi la cromatografia su metallo chelato (ioni nichel presenti su una colonna, attraverso cui fai passare la miscela di proteine. gli ioni si legano in maniera specifica alle tue proteine con l'hys-tag. poi eluisci cio� lavi la colonna e poi usi un enzima per tagliare via il tag)
piu o meno � cosi
comunque se fai una ricerca su internet trovi tutto quello che ti serve.
spero di esserti stata utile
ciao

daniela82
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2008 : 21:37:02

grazie mille marina1983

qualcun'altro ha altre idee..