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spika87
Nuovo Arrivato
Città: roma
60 Messaggi |
 Inserito il - 07 maggio 2008 : 21:45:14
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Ciao!Ho un dubbio sulla tecnica del Southern...con questo metodo ottengo una serie di frammenti del dna di partenza e dopo tutti i vari passaggi uso una sonda...ma questa sonda la scelgo io in base alla sequenza che sto cercando?Come magari un RFLP?quand'è che uso questa tecnica?
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frau_frosch
Utente Junior
Città: Boston
225 Messaggi |
Inserito il - 07 maggio 2008 : 23:48:16
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La scegli in base alla sequenza. Citavi l'RFLP, in quel caso ad esempio potresti fare in modo che la tua sonda copra la regione del sito di restrizione, così da poter avere segnale su una o due bande a seconda che il sito sia assente o presente.
La tecnica puoi usarla per molti scopi, dalla diagnostica al clonaggio posizionale...in generale ogni volta che hai bisogno di evidenziare una sequenza! |
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spika87
Nuovo Arrivato
Città: roma
60 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2008 : 13:27:48
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graziesei stata molto chiara |
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2008 : 15:31:50
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Ammetti di voler capire quale fra tutti i frammenti ottenuti,contiene per esempio il gene che codifica per l'enzima sintetasi.
Per individuare questo gene,si devono mettere a contatto tutti i frammenti ottenuti dal blotting,con un frammento(la sonda) che è stato già ben caratterizzato e che contiene il gene che stai studiando:per esempio se stai cercando di caratterizzare il gene per l'enzima acido grasso sintetasi che sintetizza gli acidi grasi nel ratto,la sonda sarà un frammento di DNA isolato e caratterizzato da topo,che è tassonomicamente molto vicino al ratto.
Questo perchè presumibilmente la sequenza del gene del topo è molto simile alla sequenza del gene del ratto.
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SII IL LUSSO DI TE STESSO |
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terreno85
Utente Junior
235 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2008 : 21:33:41
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| bhe aspetta !! La tecnica del southern blotting nn è una tecnica che ti frammenta il DNA in varie porzioni ! . In primo luogo si estrae del DNA da cellule nucleate come per esmpio le cellule del sangue (linfociti),che puoi separare dalla cellula sapendo che il nucleo è l'organello piu grande di essa , percio attraverso vari giri di centrifiga puoi ricavare (pellet) i nuclei , trattarli con detergenti chimici che ti rompono la membrana , con proteasi e con RNasi che degradano rispettivamente le proteine (istoni per es) e gli RNA .Una volta fatto ciò incubi il DNA con ENZIMI DI RESTRIZIONE --> che sono qst che determinano la formazione di frammenti del DNA ( come anche la sonizzazione oppure il micrococcale )poi li separi in base alle dimensioni con ELETTROFORESI ed infine applichi il SOUTHER BLOTTING . La sonda cmq lo trovi a secondo di cosa stai cercando!! Fammi saper che ti aiuto .Ciao |
Una teoria può esserre provata da un esperimento. Ma nessun percorso guida dall'esperimento alla nascita di una teoria |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2008 : 21:52:29
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Citazione:
Messaggio inserito da SerenaS
Ammetti di voler capire quale fra tutti i frammenti ottenuti,contiene per esempio il gene che codifica per l'enzima sintetasi.
Per individuare questo gene,si devono mettere a contatto tutti i frammenti ottenuti dal blotting,con un frammento(la sonda) che è stato già ben caratterizzato e che contiene il gene che stai studiando:per esempio se stai cercando di caratterizzare il gene per l'enzima acido grasso sintetasi che sintetizza gli acidi grasi nel ratto,la sonda sarà un frammento di DNA isolato e caratterizzato da topo,che è tassonomicamente molto vicino al ratto.
Questo perchè presumibilmente la sequenza del gene del topo è molto simile alla sequenza del gene del ratto.
l acido grasso sintasi ...vedi tu quanti enzimi in piu' mi hanno fatto studiare...e come viene semplice un clonaggio per omologia dovrebbe essere.. ... ma poi tassonomicamente...o dal punto di vista filogenetico |
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2008 : 23:15:57
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non capisco a cosa ti vuoi appellare..cmq è tassonomicamente |
SII IL LUSSO DI TE STESSO |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2008 : 23:58:28
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Beddha stria,
la tassonomia e' la branca della sistematica che si occupa di attribuire i nomi scientifici,descrivere e classificare gli organismi sulla base delle relazioni evolutive (filogenesi)o altre somiglianze,
visto che si sta parlando di acidi nucleici,non ti pare piu' corretto dire filogenesi...
http://it.wikipedia.org/wiki/Filogenesi
http://it.wikipedia.org/wiki/Tassonomia
per il resto con la funzione cerca nel forum troverai tante discussioni riguardanti i southern blotting
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2008 : 09:51:48
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Ma allora..invece di farti il professorone ,avresti potuto semplicemente correggere, visto che già sapevi che così non era giusto
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SII IL LUSSO DI TE STESSO |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2008 : 17:10:16
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grazie del titolo 
era per spronarti a cercare la risposta giusta,l ho trovata io avresti potuto cercare anche tu...o al massimo inizia con ..secondo me..o forse e' cosi' .. ma ora la mia foto del contest ti piace di piu'? |
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2008 : 21:11:43
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Si la tua foto nel contest è la più più più più migliorissima..mi correggerai anche questa volta???
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2008 : 21:34:54
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| No figlia di Dante....non avrei il motivo |
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n/a
deleted
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 28 maggio 2008 : 15:06:46
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L'obiettivo è quello di trovare, tra i frammenti prodotti con enzimi di restrizione e separati con l'elettroforesi,una particolare sequenza di DNA. La sequenza viene visualizzata utilizzando una sonda marcata che sarà complementare alla sequenza da cercare.Quindi devo già conoscere la sequenza che cerco per poter preparare la sonda.
La tecnica vien utilizzata perchè l'elettroforesi separa solo in base al peso molecolare e non in base alla sequenza. |
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