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123456
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
 Inserito il - 14 maggio 2008 : 14:54:02
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ciao a tutti,
avrei un nuovo problema. Come faccio a concentrare il Dna estratto con colonnine, utilizzando l'etanolo?
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vanna |
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max2612
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 14 maggio 2008 : 18:09:28
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ciao prova a leggere il protocollo del kit della colonnina, in genere c'è una parte che ti da un po di spiegazioni sulle caratteristiche del kit e il principio su cui si basa. se nn hai il protocollo lo puoi scaricare in digitale dal sito della casa produttrice del kit stesso.
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 14 maggio 2008 : 18:59:40
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hai messo piu' TE di quanto dovevi? 
cmq ci vuole propanolo isopropanolo sali...se ti serve sapere come si precipita ti scrivo piu' tardi ora non ho tempo |
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 14 maggio 2008 : 21:45:33
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| Se non vuoi ripecipitare usa un liofilizzatore, non è il massimo, ma almeno non devi riprecipitare e risospendere. Poi a mie spese ho imparato che è molto meglio eluire in un volume il più piccolo possibile e al massimo diluire dopo. |
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123456
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2008 : 10:49:33
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| grazie a tutti, ma.... il protocollo del kit è stato seguito nei minimi particolari, la quantità di TE finale non la posso modificare, il liofilizzatore l'ho usato e non va bene,quindi non so cosa fare. |
vanna |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2008 : 11:24:21
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123456 ... ma dove sta scritto che non puoi modificare la quantita' di TE ? ... non dire fesserie  |
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stef2
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2008 : 11:35:06
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Ciao, ti riporto di seguito il protocollo che seguo quando devo precipitare il DNa (di solito ottengo sempre buoni risultati!!):
1)Aggiungere a ciascun campione 3 volumi di EtOH assoluto e Sodio Acetato 3M(1/10 del volume di partenza,cioè se il tuo campione era diluito in 300 ul allora devi aggiungere 30ul Na acetato);
2) Vortexare bene i campioni x 30secondi;
3)lasciare precipitare i campioni a -80°C x circa 1h o anche + (C'è chi preferisce lasciarli a -20°C...xò io mi trovo meglio così!!);
4)centrifugare i campioni a max velocità (14000rpm)x 30 minuti a 4°C;
5)scaricare il sovranatatnte e conservare il pellet;
6)lavare il pellet con 1 ml di EtOH 70% (agitare il campione capovolgendolo 3-4 volte);
7)centrifugare il campione a max velox (come sopra) per 5-10 minuti;
8)scaricare il sovranatatnte (cercare di allonanare sia decantando che aspirando con la pipetta , facendo attenzione a non toccare il pellet, tutto l'EtOH);
9)a questo punto se hai una pompa che aspiri sotto vuoto puoi utilizzarla per allontanare tutti i residui di EtOH, oppure (procedimento che seguo io) pongo il pellet sotto cappa a flusso laminare per circa 30 min (il tempo è variabile,considera che devi assicurarti che tutto l'Etoh sia evaporato);
10)risospendi infine il pellet in TE oppure H2O, in relazione alla quantità di precipitato che hai ottenuto(ovviamente volume ridotto rispetto a quello di partenza!!).
Fammi sapere se è tutto chiaro e se il protocollo va bene per te.
Nota per la prossima estrazione:
anche io estraggo DNA seguendo il procedimentoo delle colonnine e per aumentare la concentrazione finale riduco sempre il volume di buffer TE consigliatomi dal protocollo (potresti farlo anche tu x così eviti il passaggio della precipitazione!!);
invece per aumentare le quantità ripeto il passaggio finale, cioè eluizione in buffer TE, 2 volte.
tutto chiaro?
ciao
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stef2 |
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123456
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2008 : 12:55:03
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Grazie stef2, ti farò sapere |
vanna |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2008 : 21:01:20
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| Patrizio non essere sempre così diretto!!! Sei sempre il solito... |
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Discussione |
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concentrazione del dna
Didattica
