Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
Silvia P.
Nuovo Arrivato
Prov.: Padova
Città: Padova
5 Messaggi |
 Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:20:56
|
Salve a tutti, io sto cercando un modo per riuscire a quantificare uno specifico mRNA prodotto in un particolare individuo. Mi spiego meglio: io ho un certo numero di popolazioni di piante dove si ipotizza che ci sia una diversa espressione di un particolare trascritto.. c'è un modo per quantificare questa espressione differenziale?
Grazie a tutti!
|
Silvia P. |
|
|
|
|
gianpierolandolfi
Nuovo Arrivato
84 Messaggi |
Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:30:12
|
se vuoi la teoria ho cercato semplicemente su google quantificazione di Rna e ho trovato su wikipedia:
"Due metodi più moderni per misurare la quantità di un singolo mRNA sono la real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) o la reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), che permettono di quantificare la presenza di un determinato trascritto anche in pochi nanolitri di estratto cellulare. Per tale elevatissima sensibilità la RT-PCR è attualmente la tecnica di elezione, anche se i costi per gli strumenti ed i reagenti possono essere proibitivi.
Oltre a tali metodi, che consentono di quantificare solo poche differenti molecole di mRNA per volta, esistono metodologie che permettono di effettuare screening molto ampi del trascritto complessivo di una cellula. Una di queste metodologie è quella dei DNA microarray che, attraverso l'utilizzo di supporti che contengono migliaia di sonde di DNA complementari ai trascritti della cellula, è in grado di fornire un'analisi contemporanea di migliaia di differenti mRNA."
estratto da http://it.wikipedia.org/wiki/Espressione_genica
se hai bisogno del protocolo allora devi cercare su pubmed.
Se hai bisogno di qualcosa di piu' specifico non e' che lo potresti dire cosi' ti possiamo aiutare meglio...
ciao
|
 |
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:44:10
|
Si il metodo più utilizzato ormai è sicuramente la Real-Time PCR (ovviamente preceduta da RT = retrotrascizione).
Citazione:
Messaggio inserito da gianpierolandolfi
"Due metodi più moderni per misurare la quantità di un singolo mRNA sono la real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) o la reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), che permettono di quantificare la presenza di un determinato trascritto anche in pochi nanolitri di estratto cellulare. Per tale elevatissima sensibilità la RT-PCR è attualmente la tecnica di elezione, anche se i costi per gli strumenti ed i reagenti possono essere proibitivi.
Fai molta attenzione a questa frase... spesso per RT-PCR si intende Real-Time PCR al posto di Reverse Transcription PCR e questo genera confusione!!!
In realtà per quantificare un trascritto devi prima fare una trascrizione inversa (RT) e poi una PCR che in questo caso deve essere quantitativa! Il metodo più utilizzato di PCR quantitativa è sicuramente la Real-Time PCR, ma è appunto molto costosa, sopratutto se devi comprarti la strumentazione! Esistono però altri tipi di PCR quantitativa o semiquantitativa (come ad es. la PCR-competitiva), se cerchi un po' nel forum trovi delle discussioni al riguardo.
I Microarray sono utili se devi screenare una serie di trascritti, non uno solo!
Ah dimenticavo... Benvenuta sul forum!!!
 |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
quantificazione mRNA
Didattica
