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GHYA81
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
9 Messaggi |
 Inserito il - 15 luglio 2008 : 20:53:43
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ciao a tutti sto studiando la metodica dell'elettroforesi su gel d'agarosio e non riesco a capire se il dna frammentato è denaturato prima di essere messo nel pozzetto o se è denaturato in seguito nel pozzetto stesso.....qualcuno saprebbe rispondermi?
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 20:56:34
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se è denaturato lo è prima di caricarlo
ciao! |
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E. Coli
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 21:27:36
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Dipende: se visualizzi ad esempio un frammento di PCR anche di dimensioni elevate è denaturato, ma un gel di agarosio può anche essere utile per controllare ad esempio se DNA plasmidico che hai a -20°C da mesi sia ancora buono o meno. in questo caso sul tuo gel non hai DNA denaturato, anzi un plasmidico solitamente ti fornisce "più bande" che sono le varie topologie...a seconda della forma superavvolta si ha una banda diversa.
ciaooooo  |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 21:39:36
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Citazione:
Messaggio inserito da elly_
se è denaturato lo è prima di caricarlo
ciao!
sorry x la monata: lo denatui nel gel con l'urea nn mi sembra di ricordare nel lb
ciao |
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GHYA81
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
9 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 21:50:18
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| grazie per le risposte...questo quesito era sul compito di genetica e ho avuto dei dubbi perchè i miei colleghi sostengono che è il gel d'agarosio che denatura il dna una volta posto nel pozzetto...quindi io vi chiedo è possibile una cosa del genere o è un'eresia..? cioè il dna prima di essere messo nel pozzetto oltre ad essere frammentato quali altri trattamenti deve subire? |
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E. Coli
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 16 luglio 2008 : 17:13:49
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| prego?? l'agarosio è semplicemente usato come supporto polimerico per visualizzare il DNA. non denatura il DNA e prima di essere messo nel pozzetto il DNA non deve necessariamente essere denaturato e nemmeno frammentato...ripeto che puoi visualizzare su gel di agarosio DNA plasmidici (quindi circolari, non frammentati) e superavvolti nelle loro varie topologie (quindi non denaturati).Nel pozzetto non avviene nessuna "reazione" strana con il tuo campione. semplicemente il DNA, carico negativamente, migra dal polo - al polo + e a seconda delle sue dimensioni e alla % di agarosio nel gel puoi visualizzarlo grazie alla presenza nel gel stesso di un intercalante, Etidio bromuro o intercalanti di altro genere. CIAOOOOOO ;) |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 16 luglio 2008 : 21:27:23
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Citazione:
Messaggio inserito da E. Coli
prego?? l'agarosio è semplicemente usato come supporto polimerico per visualizzare il DNA. non denatura il DNA etc.
sono d'accordo che un gel di agarosio non sempre è denaturante per il DNA, ma se ci aggiungi ad esempio urea lo diventa. l'elettroforesi di questo genere vengono usate spesso.
ad esempio:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=2224 (e se lo dicono chick80 e GFPina sarà pur vero...)
http://www.netgene.it/ita/terapia_genica3.asp (in fondo alla pagina)
probabilmente ti sei confuso con il DNA degradato...  |
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elettroforesi su gel
Didattica
