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DARIO BUONOMO
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 16 luglio 2008 : 21:00:48
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Salve a tutti,volevo chiedere cosa è l'immunolocalizzazione e come si fa'?e poi a che servono il dounce e il potter?e quale è la differenza tra i 2? cè qualcuno capace di aiutarmi???buona serata  Pina 
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2008 : 13:32:38
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Ti so dire con precisione cos'è il POTTER: è un tubo di vetro all'interno del quale è inserito un pestello che può esssere di vetro o teflon (potter) e che viene utilizzato per distruggere la membrana cellulare, dato che lo spazio che c'è tra il pestello e la parete del tubo ha un diametro inferiore a quello della cellula.Può essere azionato a mano oppure tramite un motorino.
Viene utilizzato per effuttuare, appunto, la distruzione meccanica delle cellule ed ottenere così una sospensione che poi potrà essere utilizzata per lle applicazioni più svariate.
Comunque la potterizzazione viene usata per lo più per tessuti morbidi per esempio come l'intestino.
Spero intendevi questo.
CIAOCIAO |
SII IL LUSSO DI TE STESSO |
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DARIO BUONOMO
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2008 : 18:29:54
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| Tante grazie |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2008 : 22:16:04
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mi pare che il potter sia meccanico e il dounce manuale ma il principio è sempre lo stesso...
Con l'immunolocalizzazione tu vai a rilevare la presenza di una certa molecola in un tessuto o in una popolazione cellulare usando fluorocromi, enzimi, radionuclidi, sostanze elettrondense che si leghino al tuo antigene e ne permettano la rilevazione al microscopio ( ottico o elettronico). questo preve de l'eventuale permeabilizzazione cellulare se l'antigene è intracitoplasmatico, e la fissazione dei tessuti preparati come sezioni istologiche
I marcatori comunemente usati in immunocitochimica sono di 5 tipi: 1. Enzimi; 2. Fluorocromi; 3. Radionuclidi; 4. Sostanze elettrondense; 5. Avidina-biotina.
1. Enzimi - Gli enzimi usati prevalentemente sono perossidasi e fosfatasi alcalina. I substrati sono convertiti dall' enzima in prodotti colorati ed insolubili che contrassegnano la presenza dell' Ag. L'uso degli enzimi e' prevalente nell' immunoistochimica e la scelta del particolare enzima (Ab secondario coniugato con l'enzima) è dettato più dalla esperienza dell' operatore che da marcate differenze nell' uso o nei risultati.
2. Fluorocromi - I fluorocromi sono sostanze che quando vengono irradiate con luce ultravioletta riemettono luce nello spettro del visibile. Il loro uso richiede quindi la disponibilita' di un microscopio a fluorescenza. I fluorocromi piu comuni sono l' isotiocianato di fluoresceina (FITC) e la tetrametil rodamina (TRITC). Il primo ha una colorazione verde gialla, il secondo rossa.
Fluorocromi diversi vengono utilizzati contemporaneamente per doppie marcature, ad esempio coniugandoli a mAb che riconoscono Ag diversi.
3. Radionuclidi - Anticorpi primari o secondari possono essere coniugati con lo Iodio 125. Il rilevamento dell' immunocomplesso viene eseguito con tecnica autoradiografica.
L'autoradiografia consiste nell' immergere il vetrino con la sezione istologica in una emulsione fotografica e quindi lasciato asciugare. L' emissione radioattiva dello 125I determina la precipitazione dei sali d'argento dell'emulsione che viene quindi sviluppata come una pellicola fotografica. La presenza dell' immunocomplesso viene rivelata da un annerimento della sezione. L' uso dei radionuclidi garantisce la massima sensibilita' ed il migliore dettaglio alla reazione immunochimica. L'esame del preparato puo' essere fatto sia al microscopio ottico che a quello elettronico.
4. Sostanze elettrondense - Qualora sia necessario esaminare il preparato al microscopio elettronico per la localizzazione dell' Ag a livello di struttura subcellulare, vengono utilizzati anticorpi coniugati a sostanze opache al fascio elettronico del microscopio. Queste sono la ferritina e l' oro colloidale. La ferritina e' una proteina in grado di formare complessi ad elevato peso molecolare (750 kDa) ed elevato contenuto di ferro (fino al 23%, presente al centro della proteina sotto forma di micelle di idrossido ferrico). L' oro colloidale si ottiene per riduzione di oro tetracloruro. Si formano particelle sferiche, con diametro da 4 a 20 nm a seconda dell' agente riducente impiegato, che aderiscono alle proteine per carica elettrostatica.
5. Il sistema avidina-biotina - L' avidina-biotina non è in realtà un tracciante vero e proprio ma un sistema universale di marcatura che utilizza utti i sistemi elencati in precedenza. L' avidina è una proteina di 68 kDa in grado di legare ad alta affinita' 4 molecole di biotina. La biotina (vitmina H) può essere facilmente coniugata ai gruppi laterali (aminici, carbossilici, sulfidrilici, ecc.) delle proteine. Parallelamente, l'avidina viene coniugata ad enzimi, fluorocromi, ecc.. Dopo l'interazione dell' Ab primario e dell' Ab secondario biotinato, viene aggiunto il tracciante coniugato all' avidina, che, in virtù della sua elevatissima affinità per la biotina, lega stabilmente ed efficientemente l' immunocomplesso.
Il vantaggio notevole offerto da tale sistema è che, a parte la grande sensibilità e precisione, è sufficiente marcare con biotina l'anticorpo (anche primario) per poter utilizzare tutta una serie di avidine commerciali coniugate con i più diversi traccianti (fluorocromi, radionuclidi, sostanze elettrondense) che consentono l'esame al microscopio.
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Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2008 : 23:49:02
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Scusa Dario, ma perchè modificare in continuazione il messaggio iniziale solo per fare in modo che sia sempre in cima alla lista?
Anche se in teoria non è esplicitamente menzionato nel regolamento non mi sembra molto corretto!
Non ti vanno bene le risposte che sono state date?
Hai bisogno di ulteriori chiarimenti?
Perchè non lo chiedi semplicemente?
Comunque
Citazione:
da Regolamento:
5) Nessuno è MAI obbligato a rispondere a nessun messaggio. Se lo fa è per sua pura gioia e gaudio. Evitare quindi di mandare un messaggio ogni 10 minuti chiedendo di rispondere alla propria domanda.
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 25 luglio 2008 : 11:28:05
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| ma io sapevo che un utente può modificare il messaggio solo fino a quando qualcuno non gli risponde... |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 26 luglio 2008 : 00:23:03
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Innanzitutto impara a moderare i termini! Sia sul forum che nei messaggi privati!!!
@iside: no se sei l'autore puoi modificare il primo post... come lo dimostra questa discussione! |
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Potter e immunolocalizzazione
Didattica
