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glo
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo


22 Messaggi

Inserito il - 05 gennaio 2006 : 12:26:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di glo  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di glo Invia a glo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
vorrei sapere se l'EtBr,durante la corsa elettroforetica,migra con il DNA dal polo- a quello +, o se fà il percorso inverso. inoltre,quanto EtBr si intercalerà tra le basi e quanto ne resterà nel gel? ed infine,ttt qst da cosa dipende? in parole povere ditemi ttt qll ke sapete sull'EtBr...siate in tanti: lunedì ho l'esame!!!

Ornella

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 05 gennaio 2006 : 13:05:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ah! L'EtBr questo sconosciuto!
Allora, l'etidio e' un intercalante e come tutti gli intercalanti ha una struttura aromatica molto simile a quella delle basi azotate e per questo riesce ad "insinuarsi" all'interno della doppia elica. (vedi struttura qui sotto)


L'etidio e' carico + quindi dovrebbe migrare verso il catodo, tranne quello che si e' intercalato e si muove con il DNA verso l'anodo.

Per quanto riguarda quanto se ne intercala... non ho proprio idea, ma basta poco, credimi (se metti < 0.1% di etidio nel gel va gia bene in molti casi).

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DNAfingerprinting
Nuovo Arrivato

Prov.: Pordenone
Città: Fiume Veneto


23 Messaggi

Inserito il - 05 gennaio 2006 : 13:09:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di DNAfingerprinting Invia a DNAfingerprinting un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il bropmuro di etidio è un colorante mutageno in grado di intercalarsi tra le basi del DNA (quindi migra con esso nella corsa elettroforetica..) causando un allungamento ed un irrigidimento nella molecola.
e prova a dare un'okkiata qui...
http://www.minerva.unito.it/Chimica&Industria/Tesi1/ElettroforesiAcidiNucleici.htm
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biotech
Utente Junior

Prov.: Padova
Città: Padova


170 Messaggi

Inserito il - 10 gennaio 2006 : 17:48:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotech  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di biotech Invia a biotech un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La domanda può sembrare stupida, ma cosa serve esattamente il bromuro d'etidio?

http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif
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Luis 22
Utente

Baricalcio

Città: Bari


755 Messaggi

Inserito il - 10 gennaio 2006 : 19:41:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Luis 22  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Luis 22  Invia a Luis 22 un messaggio Yahoo! Invia a Luis 22 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da biotech

La domanda può sembrare stupida, ma cosa serve esattamente il bromuro d'etidio?



E' una sostanza fluorescente, intercalante del DNA, usata per il dosaggio fluorimetrico, poichè l'intensità di fluorescenza è proporzionale alla quantità di etidio che si intercala che, a sua volta, è proporzionale alle dimensioni degli acidi nucleici.

Non solo, può avere anche altre applicazioni, come ad esempio nell'estrazione di DNA plasmidico da cellule batteriche.



La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)&
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Barney1
Nuovo Arrivato



61 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2006 : 12:16:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Barney1 Invia a Barney1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da biotech

La domanda può sembrare stupida, ma cosa serve esattamente il bromuro d'etidio?


Bhè.. se non usi un intercalante come l'Etidio Bromuro quando fai una corsa elettroforetica.. dopo come fai a vedere le bande?! L'etidio bromuro è una sostanza che irradiata con raggi uv emette florescenza e intercalandosi nel DNA ne mostra la sua posizione nel gel..
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biotech
Utente Junior

Prov.: Padova
Città: Padova


170 Messaggi

Inserito il - 14 gennaio 2006 : 18:46:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotech  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di biotech Invia a biotech un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ok grazie... ;)

http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif
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canaparo
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2007 : 12:37:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di canaparo Invia a canaparo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il gel per la corsa elettroforetica per hla, può essere preparato nella cappa pre pcr Grazie
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Saretta
Utente Junior

micros

Prov.: Roma
Città: Provincia di Roma


263 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2008 : 10:29:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Saretta Invia a Saretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi chiedevo, quanto è pericoloso questo Etidio? Ho letto la descrizione sulla sezione reagenti del sito ma mi chiedevo al livello di esperienza, mai venuti in contatto?
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Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2008 : 19:39:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io me lo spruzzai su una manica del camice, per adesso non ho avuto sintomi.

"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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morgan79
Utente Junior

insuperabile

Prov.: Bari


143 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2008 : 19:40:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di morgan79  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di morgan79 Invia a morgan79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
quanto è pericoloso?? tanto... anzi tantissimo.
basti pensare che grazie alla sua capacità di intercalarsi tra le basi azotate del DNA sul gel di agarosio è anche in grado di intercalarsi nel DNA dell'operatore. E pensa un pò se si dovesse intercalare tra i geni che regolano il ciclo cellulare, provocando un cambio di espressione, cosa potrebbe succedere...

il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare
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Anyra
Utente Junior

Anyra

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara


212 Messaggi

Inserito il - 13 ottobre 2008 : 10:14:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Anyra Invia a Anyra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da canaparo

Il gel per la corsa elettroforetica per hla, può essere preparato nella cappa pre pcr Grazie



Solo se la cappa ha i filtri per al carbonio in uscita per le sostanze chimiche e i solventi, altrimenti NO!

RICORDATE PIU' SEMPLICE E PIU' VELOCE NON SONO MAI SICURI.
MEGLIO PERDERE 2 MINUTI PER ANDARE IN CAPPA CHIMICA CHE RESIRARE ETBR!!!!!!!!

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw
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biotool
Nuovo Arrivato



97 Messaggi

Inserito il - 27 gennaio 2009 : 19:36:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotool Invia a biotool un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti, mi sono da poco iscritto al forum!
Vorrei subito farvi una domanda seria al riguardo: nella scheda di sicurezza l'etidio bromuro è indicato come irritante se a contatto con l'epidermide, mentre tossico per inalazione. Quindi non mi è bene chiaro il pericolo se si è a contatto con questa sostanza, ad esempio con una goccia di etidio sull'epidermide del braccio. Vi è mai successo? Quali sono i rischi?
Grazie mille
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 27 gennaio 2009 : 20:12:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Una goccia di BrEt sulla pelle lavata subito una volta non ti porterà a nessun danno. Se lo fai tutti i giorni ovviamente il discorso cambia.

Oltre a quanto già detto (usarlo sotto cappa) aggiungerei di usare guanti in vinile e non in lattice quando si maneggia l'etidio e di non versarlo mai nell'agar bollente, lasciarlo sempre raffreddare prima per minimizzare la produzione di vapori.

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biotool
Nuovo Arrivato



97 Messaggi

Inserito il - 28 gennaio 2009 : 09:47:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotool Invia a biotool un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti ringazio della pronta risposta, ero piuttosto preoccupato!
Il fatto è che molte cose non vengono dette, soprattutto sulla sicurezza e sulla pericolosità delle sostanze...
Visto che devo fare parecchi gel vorrei essere informato...si metto l'etidio in agar ormai tiepido, ma usando guanti semplici e non sotto cappa (non abbiamo cappe chimiche vicine)
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 28 gennaio 2009 : 11:03:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

... aggiungerei di usare guanti in vinile e non in lattice quando si maneggia l'etidio ...

No non in vinile! E' peggio del lattice, vanno usati guanti in nitrile.
Comunque sia se non si hanno i guanti in nitrile, il consiglio è di usare il doppio guanto ma in ogni caso non è che uno si rovescia sulle mani l'etidio (di solito!).
Allego un documento sulla sicurezza per l'uso dell'Etidio Bromuro:
Safe handling of ethidium bromide
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 28 gennaio 2009 : 11:39:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa, hai ragione... volevo dire nitrile. Veramente non sapevo neanche dell'esistenza dei guanti in vinile...

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gio87
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 19:02:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gio87 Invia a gio87 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sono uno studente...oggi per sbaglio mi sono appoggiato con la mano sul bancone sporco di etidio bromuro...cosa potrebbe capitarmi? Sono un po preoccupato..
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 19:10:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh a parte il fatto che in laboratorio bisognerebbe sempre fare attenzione, non è che per una volta che vieni a contatto con dosi minime di Etidio (non ti sei rovesciato addosso il flacone, ma hai messo la mano sul bancone dove si usa l'etidio) ci siano danni così gravi.
Cito quanto ha detto chick80 sopra:
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

Una goccia di BrEt sulla pelle lavata subito una volta non ti porterà a nessun danno. Se lo fai tutti i giorni ovviamente il discorso cambia.

fai solo ben attenzione la prossima volta!

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NicolasFlamel
Nuovo Arrivato

aldebaran

Città: Napoli


30 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 20:23:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di NicolasFlamel Invia a NicolasFlamel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
quanto EtBr si intercalerà tra le basi

Dipende dalla topologia del DNA: un DNA circolare superavvolto ne potrà assumere poco (in quanto bloccato nello svolgimento dell'elica - infatti l'etidio provoca un rilassamento dell'elica, svolgendola); se invece abbiamo un cccDNA con un nick possiamo già inserirne qualcosa in più, in un DNA lineare possiamo metterne più di quanto potevamo negl'esempi precedenti.
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viodice88
Nuovo Arrivato


Prov.: Napoli
Città: casandrino


41 Messaggi

Inserito il - 25 agosto 2009 : 11:13:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di viodice88 Invia a viodice88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve a tutti..avrei una domanda da farvi in merito al bromuro di etidio. allora cito il Watson "quando lo ione etidio si intercala fra due coppie di basi, causa uno srotolamento dell'elica di 26° riducendo la normale rotazione delle coppie di basi da 36° a 10°" ora, quello che so io è che il bromuro di etidio causa un rilassamento dell'elica, ma se è vero, come credo che sia, quello che dice il libro, ad ogni giro dell'elica non ho più 10 paia di basi ma ben 36. questo non rende il DNA meno rilassato?
Attendo vostre risposte..pleaaaaaaaaase

violetta iodice
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babilei
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 25 agosto 2009 : 14:06:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di babilei Invia a babilei un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao

noi l'etidio non lo usiamo più proprio.
Usiamo invece il sybr safe che stando a quello che dice Invitrogen, è molto meno dannoso.


http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Nucleic-Acid-Purification-and-Analysis/Nucleic-Acid-Gel-Electrophoresis/nucleic_acid_gel_electrophoresis/Nucleic-Acid-Stains/SybrSafe-A-better-DNA-gel-stain.html

Barbara
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