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lallabell
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24 Messaggi |
 Inserito il - 05 settembre 2008 : 18:03:16
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Ciao, ho un vuoto di memoria e non sono riuscita a trovare niente sui libri. volevo sapere se i siti cos, oltre ad essere le estremitā coesive del fago lambda, hanno un diverso significato in biologia molecolare.
Ciao e grazie 1000
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Dionysos
Moderatore
Cittā: Heidelberg
1913 Messaggi |
 Inserito il - 05 settembre 2008 : 18:44:05
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| Uhm forse ti riferisci al loro utilizzo nei vettori cosmidici (cosmidi, detti anche plasmidi cos) ? |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontā e della libertā
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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lallabell
Nuovo Arrivato
24 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 15:02:46
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| no proprio siti cos ma forse ricordo male |
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dani.f82
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 18 dicembre 2008 : 12:29:51
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Ciao,
potreste darmi un aiuto?
Vorrei sapere se questa che vi scrivo č la sequenza giusta dei siti COS...
Grazie mille in anticipo!
Dani
5'GGGCGGCGACCT3'
3'CCCGCCGCTGGA5' |
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 18 dicembre 2008 : 13:44:58
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Ho fatto una rapida ricerca in pubmed e per il fago lambda P2 mi da: ggcgaggcgg ggaaagcac
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dani.f82
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2008 : 15:57:54
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...
che sia diversa per diversi tipi di fago? |
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dani.f82
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2008 : 17:08:31
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Scusate me ne dimenticavo...
come si fa ad impedire al vettore di clonazione lambda gt10 di riassociarsi dopo digestione con EcoRI? (il passaggio successivo č quello di metterlo a contatto con il cDNA da clonare)
Grazie mille.
Dani |
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gilthanas
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100 Messaggi |
Inserito il - 22 dicembre 2008 : 00:01:50
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| Basta defosforilare le estremitā di un vettore aperto (o meglio linearizzato) per impedire o sfavorire la richiusura. E' sufficiente una reazione di defosforilazione con fosfatasi alcalina o altro tipo di fosfatasi che hai a disposizione. E' una semplice reazione come le normali digestioni con enzimi di restrizioni solo che in questo caso l'enzima va ha defosforilare le estremitā...mi raccomando defosforila solo il vettore e non l'inserto specialmente se proviene da PCR altrimenti la ligation non ti verrā mai.... |
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dani.f82
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 28 dicembre 2008 : 19:47:44
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Grazie mille gilthanas,
scusami il ritardo!
Stavo studiando il clonaggio dei cDNA (per costruire una libreria di cDNA) e mi era sfuggito questo particolare...
Solo che negli appunti della prof. dice che il vettore viene metilato... mi č sfuggito qualcos'altro o sono metodologie alternative?
Ancora grazie!
Dani |
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Marshepherd
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22 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2014 : 23:52:43
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Ciao porto a galla la discussione perchč volevo chiedervi, che differenza c'č nell'utilizzo di vettori cosmidici a singolo e a doppio sito cos?
Vi prego aiutatemi non sto trovando una mazza sui libri..
c'č scritto solo che per la costruzione si possono utilizzare questi due tipi di cosmidi:
- il primo ha il sito cos l'ori, un sito unico di restrizione e il gene amp^r
- il secondo ha due siti cos e il gene lacZ' con il polilinker oltre a quella che č la struttura del cosmide con un singolo sito cos.
Apparte queste differenze stutturali, il vantaggio nell'utilizzare uno o l'altro qual'č? e poi a che servono due siti cos se uno giā basta per "mascherare" il plasmide come DNA fagico?
Grazie in anticipo! |
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paolocata97
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 05 giugno 2018 : 10:39:45
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Citazione:
Messaggio inserito da dani.f82
Grazie mille gilthanas,
scusami il ritardo!
Stavo studiando il clonaggio dei cDNA (per costruire una libreria di cDNA) e mi era sfuggito questo particolare...
Solo che negli appunti della prof. dice che il vettore viene metilato... mi č sfuggito qualcos'altro o sono metodologie alternative?
Ancora grazie!
Dani
Ciao, il DNA batterico metilato non viene processato dagli enzimi di restrizione. In questo caso Metilazione e Defosoforilazione hanno funzioni diverse. La prima č una modifica covalente del DNA che funge da segnale per i RE, la seconda č proprio una tecnica che viene utilizzata in Lab per evitare che i vettori si richiudano riformando il legame fosfodiesterico.  |
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