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chiocciolina81
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 08 maggio 2012 : 13:45:01
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ciao mi chiamo Marzia sono una studentessa di veterinaria...stò preparando l'esame di biologia molecolare e biotecnologie qualcuno mi può illuminare???è qualcosa di incomprensibile...elettroforesi bidimensionale,e.capillare,spettrometria di massa,blotting:western,northen e sourthen,microarray,sequenziamento,ibridazione,arms,rflp,spettroscopia,cromatografia di tutti i tipi!!!???aaaaa ne uscirò scema!!!
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
 Inserito il - 08 maggio 2012 : 13:56:43
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si, ma dove sta il problema di preciso?
Di certo nessuno si metterà a spiegarti tutte queste tecniche (e penso neppure una), al massimo ti verranno consigliati dei testi... |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 15:20:22
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| troppi troppissimi argomenti. come dice 0barra, non aspettarti che qualcuno si metta a descriverti tutte le tecniche che hai elencato...stiamo parlando di un programma di esame (quasi) completo!!! cosa, di queste tecniche, ti è poco chiaro? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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chiocciolina81
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 15:38:58
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Bè certo che siete tutti molto gentili...vi ringrazio cmq.Continuerò ad arrangiarmi con wikipedia |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 15:40:27
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Citazione:
Messaggio inserito da chiocciolina81
Bè certo che siete tutti molto gentili...vi ringrazio cmq.Continuerò ad arrangiarmi con wikipedia
Seriamente, frecciatine a parte, come potremmo aiutarti?
Hai delle slides?
Hai un libro di testo?
Quali sono i tuoi dubbi?
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chiocciolina81
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 15:54:13
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Ops scusami  si ho delle slide ma purtroppo non ci capisco niente...cioè ci stò provando ma mi sembra tutto troppo difficile,tipo nell'elettroforesi bidimensionale prima faccio una isoelettrofocalizzazione per separare le proteine in base al punto isoelettrico poi l'altra dimensione le divide in base al peso molecolare.....ma come funziona praticamente? io ho un gel di poliacrilammide posto in un campo elettrico e le mie proteine migrano sul gel ora prendo lo stesso gel e lo metto in sds?le proteine le denaturo prima di farle migrare? |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 16:49:03
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Allora cerchiamo di fare un pò di chiarezza sulla bidimansionale. E' una metodica capace di seperare le proteine in base a due parametri: il punto isoelettrico in prima dimesione (in condizioni non denaturanti) e una SDS PAGE in condizioni denaturanti in seconda dimensione. Praticamente prendi il tuo campione proteico e lo immobilizzi su una strip (che non è altro se non una fascetta, immaginala così, in cui è presente la poliacrilammide. Lo fai correre un tempo definito in un campo elettrico. Dopo di che la stessa strip sulla quale le proteine si sono separate sulla base abbiamo detto del punto isoelettrico la posizioni al di sopra di un gel di poacrilammide in condizioni denaturanti e lo fai correre. Le proteine si separano sulla base del peso molecolare. Il risultato è quel gel quadrato con tanti puntini che sicuramente hai sulle tue slide.
Per ulteriori chiarimenti chiedi pure
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chiocciolina81
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 17:01:31
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| ok perfetto grazie,e una volta ottenuto il "gel quadrato" lo devo colorare per renderlo visibile o con blu di comassie o con sali d'argento o rendendolo fluorescente e attraverso un macchinario mi viene fuori una curva giusto? |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 17:02:31
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RIFERITO ALL'ULTIMO MESSAGGIO DI MEMORE, NON ALL'ULTIMO DI CHIOCCIOLINA81 (e si, lo so che il caps lock attivo equivale ad urlare, non lo sto facendo in realtà, mi pareva solo necessario fosse ben visibile)
si, strip e gel sono in contatto fisico tra loro e le proteine vengono trasferite da una matrice all'altra.
Nota che non ha molto senso quello che proponevi, ossia di "mettere il gel in SDS", per almeno un motivo che dovrai sapere:
l'isoelettrofocalizzazione (IEF) di proteine richiede un notevole dispendio di tempo, questo perché, intuitivamente, una proteina rallenta mano a mano che si avvicina al suo punto isoelettrico. Il motivo è molto semplice: mano a mano che si avvicina al punto isoelettrico essa perde carica, ma è essa a permetterne il movimento lungo il campo elettrico. Nessun mistero perciò circa il rallentamento progressivo.
Non a caso le IEF vengono corse ad alto voltaggio.
Oltre all'alto voltaggio, un'ulteriore premura per rendere il processo più rapido, anzi, per non rallentarlo, è quello di utilizzare strip (che altro non sono che strisce di gel di poliacrilammide) con basse T e C, ossia aventi maglie molto lasse.
Ora, invece, nella SDS-PAGE le proteine vengono separate in base al loro peso molecolare: per questa ragione le maglie del gel devono esser più "serrate", di moto che la migrazione dei diversi analiti sia influenzata dalle loro dimenisoni rispettive. |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 17:09:46
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Citazione:
Messaggio inserito da chiocciolina81
ok perfetto grazie,e una volta ottenuto il "gel quadrato" lo devo colorare per renderlo visibile o con blu di comassie o con sali d'argento o rendendolo fluorescente e attraverso un macchinario mi viene fuori una curva giusto?
E a cosa ti servirebbe una curva?
Solitamente si colora con l'argentica, perché più sensibile del solo coomassie. Almeno di quello più usato.
Se parli di fluorescenza immagino tu ti stia riferendo alla DIGE. Il quel caso effettivamente devi esser in grado di rilevare la fluorescenza eccitando i fluorocromi ad un'appropriata lunghezza d'onda e poi filtrare le loro emissioni.
Ma in questo caso le proteine vengono "rese fluorescenti" prima dell'elettroforesi, legando alle catena laterale delle loro lisine dei fluorofori. |
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chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 17:34:00
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| sono informazioni che trovi su testo di analitica e forse nel caso tuo specifico su un testo di bioch applicata (anche perchè la cromatografia è qualcosa d'immenso...per cui non puoi solo scrivere cromatografia!) |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 18:09:03
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Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1
RIFERITO ALL'ULTIMO MESSAGGIO DI MEMORE, NON ALL'ULTIMO DI CHIOCCIOLINA81 (e si, lo so che il caps lock attivo equivale ad urlare, non lo sto facendo in realtà, mi pareva solo necessario fosse ben visibile)
si, strip e gel sono in contatto fisico tra loro e le proteine vengono trasferite da una matrice all'altra.
Nota che non ha molto senso quello che proponevi, ossia di "mettere il gel in SDS", per almeno un motivo che dovrai sapere:
l'isoelettrofocalizzazione (IEF) di proteine richiede un notevole dispendio di tempo, questo perché, intuitivamente, una proteina rallenta mano a mano che si avvicina al suo punto isoelettrico. Il motivo è molto semplice: mano a mano che si avvicina al punto isoelettrico essa perde carica, ma è essa a permetterne il movimento lungo il campo elettrico. Nessun mistero perciò circa il rallentamento progressivo.
Non a caso le IEF vengono corse ad alto voltaggio.
Oltre all'alto voltaggio, un'ulteriore premura per rendere il processo più rapido, anzi, per non rallentarlo, è quello di utilizzare strip (che altro non sono che strisce di gel di poliacrilammide) con basse T e C, ossia aventi maglie molto lasse.
Ora, invece, nella SDS-PAGE le proteine vengono separate in base al loro peso molecolare: per questa ragione le maglie del gel devono esser più "serrate", di moto che la migrazione dei diversi analiti sia influenzata dalle loro dimenisoni rispettive.
0barra1 mi sono limitata a provare a spiegare praticamente come si fanno le cose, o per lo meno come le hanno insegnate a me tanto tempo fa (con risultati assai scarsi ahimè), ma apprezzo le tue delucidazioni.
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 18:35:10
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Erano delucidazioni per chiocciolina, era lei ad aver parlato di "mettere il gel dell'IEF nell'SDS", io mi son limitato a spiegarle perché questo fosse concettualmente sbagliato.
Sul tuo post concordavo perfettameno |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 18:36:40
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Sorry allora avevo inteso male  |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2012 : 18:46:24
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| No problem |
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