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pollonlove
Nuovo Arrivato

12 Messaggi

Inserito il - 20 luglio 2011 : 13:02:35

ciao a tutti!
chi sa dirmi in cosa consiste una pcr multiplex,come si esegue e a cosa serve?grazie in anticipo!

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 20 luglio 2011 : 13:51:41

Io sapevo che si tratta di una variante della PCR in cui si usa un set di molteplici primers in una singola reazione di PCR. Quindi si producono diversi amplicons di diverse dimensioni che comprendono quindi diverse sequenze dell'originale campione di DNA. Credo per� si debbano scegliere dei primer le cui T di annealing siano adeguate per funzionare in una singola reazione (tutti i primers devono appaiarsi durante la seconda fase di ogni ciclo).

biocandy
Utente Junior

370 Messaggi

Inserito il - 20 luglio 2011 : 15:21:58

Infatti � un metodo che utilizza lo stesso DNA per amplificare diversi ampliconi nella stessa reazione.Le PCR Multiplex vanno messe a punto e dosati i primers per ottenere quantit� omogenee di amplificati osservabili su gel, con Real-Time o LightCycler. Si devono quindi identificare ampliconi che poi possano essere distinti per peso o per qualche caratteristica (fluorescenza)...si devono trovare coppie di primers con TM compatibili e che non diano amplificazioni non corrette. Da ogni reazione si amplifica contemporaneamente pi� di un amplicone fino ad un max di quattro o cinque. I criteri principali per questa tecnica sono la compatibilit� dei primers,TM omogenea,assenza di annealing spuri combinati tra coppie diverse,assenza di annealing tra primers,controllo delle amplificazioni desiderate.