Tornando un attimo OT: quelle dell'etidio sono scuole di pensiero, io ad es. Preferisco averlo nel gel solidificato (tanto lo uso sotto cappa e non sniffo vapori) che non avere ha soluzione contente etidio in giro, che è pure più difficile da smaltire.
Tornando un attimo OT: quelle dell'etidio sono scuole di pensiero, io ad es. Preferisco averlo nel gel solidificato (tanto lo uso sotto cappa e non sniffo vapori) che non avere ha soluzione contente etidio in giro, che è pure più difficile da smaltire.
Giusto, ma io faccio molti gel, spesso contemporaneamente e in concomitanza con i miei colleghi, e non c'è spazio sufficiente per tutto il team sotto cappa :) Poi personalmente trovo scomodo lavorare sotto cappa, soprattutto se si hanno esperimenti particolari da fare e gel grossi. Abbiamo comuque una stanza apposita per le corse elettroforetiche, in cui conserviamo anche le bottiglie contenenti l'EtBr, che vengono smaltite in un apposito contenitore per l'EtBr stesso!
Citazione:Messaggio inserito da roberta.s Qualcuno mi corregga se ho fatto errori e se il sistema biotina/avidina può essere utilizzato in altri modi che non siano un Southern blotting. Non si tratta di tecniche che utilizzo.
Mio modesto parere: tutto ciò si utilizzava 10 anni fa. Adesso in più o meno mezz'ora prepari il campione per il sequenziamento e hai un risultato chiaro, a risoluzione nucleotidica e più informativo.
Per il caso di mutazioni puntiformi puoi usare primer ALO: il primer è pensato in modo tale che l'ultimo suo nucleotide (il 3') si appai con la base che sospetti essere mutata.
Ricontrollando oggi casualmente mi rendo conto di aver commesso un errore: si tratta di ASO (Allele Specific Oligonucleotides), non di ALO.
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today. A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
Posso aggiungere un nuovo dubbio ma su un altro argomento onde evitare di creare 30000 post.....dignosi molecolare dell'anemia falciforme. Perchè dopo digestione con enzima mst II utilizzo una sonda e soprattutto perchè questa ibridizza nel caso di Hbs con un frammento di 1.35 kb mentre nel caso di Hba con uno di 1.15?
avrei bisogno di un aiuto (scusate se scrivo ancora). sn decisamente nuova in questo campo e mi hanno detto che devo arrangiarmi e questo mi crea un leggero panico.... dopo aver disegnato i primer, ora mi sono arrivati e davvero avrei bisogno che qualcuno mi dicesse cosa devo fare ora.. li devo testare ovviamente ma come? soprattutto che cDNA devo usare per testarli...HELP!!
Di norma una reazione di PCR viene eseguita in parallelo ad una che funga da controllo negativo ed un'altra che costituisca il controllo positivo, di modo da escludere che, o ridurre almeno la probabilità che, cio' che viene osservato non sia imputabile ad un errore sperimentale, per esempio.
I controlli sono semplicemente campioni di cui conosci a priori l'esito dell'amplificazione. Es: se volessi rilevare la presenza di HIV in un campione useresti come controllo negativo un campione proveniente da una persona certamente sana e la provenienza di quello positivo sarà un paziente diagnosticato con certezza come affetto. Ma il mio è solo un esempio, chi si occupa di diagnostica mi tetrapiloctomizzerà magari, il concetto pero' è quello
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primer nella PCR?
Didattica
Inserito il - 26 gennaio 2012 : 00:23:18
Inserito il - 29 gennaio 2012 : 12:36:00
