SAGE
è una tecnica attraverso la quale è possibile avere
una precisa informazione sulla composizione degli mRNA presenti nel
tessuto in quel momento. E da cui si possono quindi avere profili
di espressione genica, valutando come variano cambiando le condizioni
(trattamenti farmacologici, etc).
SAGE avviene in questo modo:
- Ad una prima estrazione di mRNA dal tessuto se ne produce il DNA
complementare.
- Da questi frammenti di cDNA, si usano degli enzimi attraverso
cui si tagliano la prima sequenza iniziale per ogni frammento.
- Successivamente si legano tra loro i vari frammenti producendo
dei lunghi concatenameri.
Poiché ogni frammento, o tag è riconducibile ad uno
specifico mRNA, è possibile valutare se e quanto è
espresso un certo gene.
Note:
Nel primo passo del SAGE, l'estrazione di mRNA si può usare
una colonna in cui vi è una resina che sfrutta la codi di
polyA tipica dei mRNA, per isolarli dagli altri RNA (gli acidi nucleici
possono essere estratti per centrifugazione, ed il DNA eliminato
con una DNAsi che verrà poi eliminata.).