-14° giorno-
Corsa elettroforetica per SDS-PAGE e trasferimento su nitrocellulosa
per Western blotting
Procedimento:
Corsa su poliacrilammide per la comparazione dell'estratto grezzo
e della proteina purificata in una SDS PAGE e Western blotting.
Note, risultati e conclusioni:
La proteina purificata presenterà probabilmente degli agenti
inquinanti, e si procederà quindi con una SDS-PAGE. Con questa
tecnica si ha una separazione in funzione del peso molecolare della
proteina, sfruttando la migrazione di questa all'interno di un gel
di poliacrilammide sottoposto ad un campo elettrico.
In particolar modo abbiamo utilizzato un gel di tipo discontinuo,
formato cioè da due porzioni:
- STACKING GEL: che permette di concentrare le proteina in una stretta
banda;
- RESOLVING GEL: che permette la separazione delle diverse specie
proteiche, in singole
Bande.
Al termine della corsa elettroforetica, avremo la
colorazione di uno dei due gel con COOMASSIE BLU, colorante che
si fissa sulla stragrande maggioranza delle proteine.
Il secondo gel verrà utilizzato per il trasferimento su nitrocellulosa,
trasferimento che avviene sfruttando un campo elettrico disposto
perpendicolarmente rispetto al gel.
Microbiologia
