-15° giorno-
Western blotting: Immunodecorazione
Procedimento:
Colorazione per metodi immunochimici della proteina ricombinante.
Note, risultati e conclusioni:
Per la colorazione, utilizziamo un coniugato ANTICORPO-ENZIMA: l'anticoropo
monoclonale sensibile alla coda di polistidine, l'enzima è
una fosfatasi alcalina.
Mettendo a contatto l'immunoconiugato e la membrana di nitrocellulosa,,
gli anticorpi si legheranno specificatamente alla coda di polistidine.
L'aggiunta di una soluzione contenente BCIP e NBT, permette la colorazione
di queste zone, nelle quali è presente l'immunoconiugato.
Il BCIP infatti viene defosforilato dall'enzima coniugato con l'anticorpo,
trasformandolo in INDOLO, il quale reagendo con l'NBT (che funge
da ossidante), forma due composti colorati e insolubili; ciò
causa una precisa ed evidente indicazione della banda in cui è
presente la TgFNR.
Microbiologia
